Stérilisation en conditions industrielles. Stérilisation à haute température
La stérilisation est le processus de destruction de tous les types de flore microbienne, y compris leurs formes de spores, et les virus en utilisant des influences physiques ou chimiques. Un dispositif médical est considéré comme stérile si sa probabilité de biocharge est égale ou inférieure à 10 puissance -6. La stérilisation doit être soumise à des dispositifs médicaux qui entrent en contact avec le sang du patient, entrent en contact avec la surface de la plaie et entrent en contact avec la membrane muqueuse et peuvent entraîner une violation de son intégrité. La stérilisation est un processus complexe mise en œuvre réussie qui nécessite les exigences suivantes :
Nettoyage efficace;
Matériaux d'emballage appropriés ;
Respect des règles de conditionnement des dispositifs médicaux ;
Respect des règles de chargement du stérilisateur avec des emballages de dispositifs médicaux ;
Qualité et quantité adéquates du matériel à stériliser ; bon fonctionnement de l'équipement;
Respect des règles de stockage, de manipulation et de transport du matériel stérilisé.
Le processus de stérilisation des instruments et produits médicaux de la fin de l'opération au stockage stérile ou à l'utilisation suivante comprend la mise en œuvre d'activités dans un certain ordre. Toutes les étapes doivent être strictement suivies pour assurer la stérilité et la longue durée de vie des instruments. Schématiquement, cela peut être représenté comme suit :
Mettre de côté les instruments après utilisation Désinfection -> Nettoyage mécanique de l'instrument -> Vérifier les dommages -> Rincer les instruments Séchage -> Emballer dans un emballage de stérilisation -> Stérilisation -> Stockage/utilisation stérile. Lors de l'utilisation d'emballages de stérilisation (papier, aluminium ou récipients de stérilisation), les instruments peuvent être stockés stériles et utilisés plus tard de 24 heures à 6 mois.
Dans les établissements médicaux, plusieurs formes d'organisation de la stérilisation sont utilisées : décentralisée, centralisée, réalisée en CSO, et mixte. En pratique dentaire ambulatoire, la stérilisation décentralisée est plus souvent utilisée (surtout dans les cliniques privées). La stérilisation centralisée est typique des cliniques dentaires de district et des grandes cliniques privées. La stérilisation décentralisée présente un certain nombre d'inconvénients importants qui affectent son efficacité. Le traitement de pré-stérilisation des produits est le plus souvent effectué manuellement et la qualité des produits de nettoyage est faible. Il est difficile de contrôler le respect de la technologie de stérilisation, les règles d'emballage, le chargement des produits dans les stérilisateurs et l'efficacité du fonctionnement de l'équipement dans des conditions de stérilisation décentralisée. Tout cela conduit à une diminution de la qualité de la stérilisation. Lors de l'utilisation d'une forme centralisée de stérilisation, il est possible d'obtenir des résultats de stérilisation plus élevés en améliorant ceux qui existent déjà et en introduisant dernières méthodes stérilisation (mécanisation du lavage des instruments et des produits médicaux, facilitation du travail du personnel paramédical, etc.). Dans le service de stérilisation centralisé, il y a : le lavage, la désinfection, l'emballage et un service de stérilisation et de stockage séparé des articles stériles. La température de l'air dans toutes les divisions doit être comprise entre 18°C et 22°C, humidité relative- 35-70%, direction du flux d'air - des zones propres aux zones relativement polluées.
Méthodes de stérilisation
La stérilisation est réalisée par des méthodes physiques: vapeur, air, glasperlénique (dans l'environnement de billes de verre chauffées), rayonnement, utilisant un rayonnement infrarouge et des méthodes chimiques: solutions produits chimiques et les gaz (tableau 3). À dernières années l'ozone (stérilisateur S0-01-SPB) et la stérilisation au plasma (installation Sterrad) sont utilisés, des installations à base d'oxyde d'éthylène, de vapeurs de formaldéhyde sont utilisées. Le choix de la méthode de stérilisation des produits dépend de leur résistance aux méthodes d'exposition à la stérilisation.
Avantages et inconvénients diverses méthodes stérilisation sont présentées dans le tableau.
Table.
Tous les produits avant la stérilisation sont soumis à un nettoyage de pré-stérilisation.
Lorsqu'ils sont stérilisés par des méthodes physiques (vapeur, air), les produits sont généralement stérilisés emballés dans des matériaux d'emballage autorisés conformément à la procédure établie pour la production et l'utilisation industrielles en Russie. Avec la méthode à la vapeur, des boîtes de stérilisation sans filtres et avec un filtre peuvent être utilisées. Avec la méthode à l'air, ainsi qu'avec les méthodes à la vapeur et au gaz, la stérilisation des instruments sous forme non emballée est autorisée.
Méthode de stérilisation à la vapeur
La méthode à la vapeur stérilise les produits médicaux, les pièces d'instruments et d'appareils en métaux résistant à la corrosion, le verre, les sous-vêtements chirurgicaux, les pansements et les sutures, les produits en caoutchouc (cathéters, sondes, tubes), le latex et les plastiques. Dans la méthode à la vapeur, l'agent stérilisant est de la vapeur d'eau saturée sous une surpression de 0,05 MPa (0,5 kgf/cm2) - 0,21 MPa (2,1 kgf/cm2) (1,1-2,0 bar) avec une température de 110-134°C. Le processus de stérilisation a lieu dans des stérilisateurs (autoclaves). Le cycle complet est de 5 à 180 minutes (tableau). Selon GOST 17726-81, le nom de cette classe d'appareils est "Stérilisateur à vapeur". Bien que le traitement à la vapeur soit assez efficace, il ne peut pas toujours assurer la stérilisation de l'instrument. La raison en est que les poches d'air dans les objets stérilisés peuvent agir comme un isolant thermique, comme les pièces à main à turbine dentaire. Pour résoudre ce problème, les autoclaves utilisent la fonction de création d'un pré-vide dans mode pulsé. Les avantages de la méthode sont un cycle court, la possibilité de stériliser des produits non résistants à la chaleur, l'utilisation de différents types d'emballages. L'inconvénient est le coût élevé de l'équipement.
Table.
Méthode de stérilisation à l'air
La stérilisation à l'air s'effectue à l'air chaud sec à une température de 160°, 180° et 200°C (tableau).
Table.
La méthode à l'air stérilise les dispositifs médicaux, les parties d'instruments et d'appareils en métaux résistant à la corrosion, les verres marqués à 200 ° C, les produits en caoutchouc de silicone. Avant la stérilisation à l'air, les produits sont soumis à un nettoyage de pré-stérilisation et doivent être séchés dans un four à une température de 85 ° C jusqu'à ce que l'humidité visible disparaisse. Un cycle complet dure jusqu'à 150 minutes. L'avantage de la stérilisation à l'air chaud par rapport à la méthode à la vapeur est le faible coût de l'équipement. Les inconvénients sont : un long cycle complet de stérilisation (au moins 30 minutes), le risque d'endommagement des instruments par des températures élevées, l'impossibilité de stériliser les tissus et les plastiques, un seul paramètre de contrôle - la température, les coûts énergétiques élevés.
Stérilisation Glasperlen
La stérilisation Glasperlen est effectuée dans des stérilisateurs, l'agent stérilisant dans lequel se trouve le milieu de billes de verre chauffées à une température de travail de 190-330°C. Lors de la stérilisation, les instruments secs sont placés dans un milieu de billes de verre chaudes sur une profondeur de plus de 15 mm. Cette méthode ne peut stériliser que des instruments dont la taille ne dépasse pas 52 mm, ils doivent être complètement immergés dans la chambre pendant 20 à 180 secondes, selon la taille. Après stérilisation, les produits sont utilisés immédiatement conformément à leur destination. La température de fonctionnement élevée et l'impossibilité d'immerger complètement les instruments dans l'environnement de stérilisation limitent la stérilisation d'une large gamme de dispositifs médicaux.
Stérilisation par méthode gazeuse
Pour la méthode de stérilisation au gaz, un mélange d'oxyde d'éthylène et de bromure de méthyle est utilisé dans un rapport pondéral de 1: 2,5, respectivement (OB), de l'oxyde d'éthylène, une solution de vapeur de formaldéhyde dans de l'alcool éthylique et de l'ozone. La stérilisation avec un mélange d'ABOUT et d'oxyde d'éthylène est effectuée à une température d'au moins 18°C, 35°C et 55°C, vapeurs d'une solution de formaldéhyde dans l'éthanol à une température de 80°C. Avant la stérilisation au gaz, les produits après le nettoyage de pré-stérilisation sont séchés jusqu'à ce que l'humidité visible disparaisse. L'évacuation de l'humidité des cavités des produits s'effectue à l'aide d'un aspirateur centralisé, et en son absence, à l'aide d'une pompe à jet d'eau reliée à un robinet d'eau. Lors de la stérilisation à l'OB et à l'oxyde d'éthylène, l'air est éliminé à une pression de 0,9 kgf/cm2. Lors de l'utilisation d'un appareil portable, une fois la stérilisation terminée, il est conservé dans hotte aspirante pendant 5 heures.
L'ozone produit dans le stérilisateur à l'ozone S0-01-SPB stérilise les produits de configuration simple en aciers et alliages résistants à la corrosion, déballés à une température ne dépassant pas 40°C. Le cycle de stérilisation (accès au mode, stérilisation, décontamination) est de 90 minutes. Après la stérilisation, les instruments sont immédiatement utilisés conformément à leur destination sans ventilation supplémentaire. La durée de conservation de la stérilité des produits est de 6 heures, sous réserve des règles d'asepsie. Lorsqu'ils sont emballés dans un tissu de coton stérile à deux couches, la période de stérilité est de 3 jours, et lorsqu'ils sont conservés dans une chambre avec irradiateurs bactéricides- 7 jours.
En Russie, la seule unité enregistrée est le stérilisateur à gaz de la société "Münchener Medical Mechanic GmbH" utilisant de la vapeur de formaldéhyde, recommandé pour la stérilisation des équipements problématiques.
exposition infrarouge
De nouvelles méthodes de stérilisation se reflètent dans le stérilisateur de stérilisation infrarouge conçu pour le traitement de stérilisation des instruments médicaux métalliques en dentisterie, microchirurgie, ophtalmologie et autres domaines de la médecine.
La haute efficacité de l'effet stérilisant IR assure la destruction complète de tous les micro-organismes étudiés, y compris tels que: S. epidermidis, S. aureus, S. sarina flava, Citrobacter diversus, Str. pneumonie, Bacillus cereus.
Accès rapide, en 30 secondes, au mode 200±3°С, cycle court de traitement de stérilisation - de 1 à 10 minutes, selon le mode sélectionné, ainsi qu'une faible consommation d'énergie, sont d'une efficacité incomparable avec l'une des méthodes utilisées jusqu'à présent la stérilisation. Le stérilisateur de stérilisation IR est facile à utiliser, ne nécessite pas d'opérateurs spécialement formés et la méthode elle-même appartient à une technologie respectueuse de l'environnement. Contrairement à la stérilisation à la vapeur, à l'air ou au glasperlène, la stérilisation IR n'attaque pas l'outil de coupe avec un agent stérilisant (rayonnement infrarouge).
rayonnement ionisant
Les agents actifs sont les rayons gamma. Dans les établissements de santé, les rayonnements ionisants ne sont pas utilisés pour la désinfection. Il est utilisé pour stériliser les produits jetables dans la production en usine.
Cette méthode est utilisée pour stériliser les dispositifs dont les matériaux ne sont pas thermiquement stables et les autres méthodes officiellement recommandées ne peuvent pas être utilisées. L'inconvénient de cette méthode est que les produits ne peuvent pas être stérilisés dans l'emballage et qu'après stérilisation, ils doivent être lavés avec un liquide stérile (eau ou solution de chlorure de sodium à 0,9 %) qui, en cas de violation des règles d'asepsie, peut entraîner une contamination secondaire des les produits stérilisés avec des micro-organismes. Pour les produits chimiques, des récipients stériles en verre, des plastiques résistants à la chaleur pouvant résister à la stérilisation à la vapeur et des métaux émaillés sont utilisés. La température des solutions, à l'exception des régimes spéciaux pour l'utilisation de peroxyde d'hydrogène et de Lysoformin 3000, doit être d'au moins 20 ° C pour les agents contenant des aldéhydes et d'au moins 18 ° C pour les autres agents (tableau).
Table.
La méthode chimique de stérilisation est largement utilisée pour le traitement des "équipements problématiques", par exemple, pour les équipements à fibres optiques, les équipements d'anesthésie, les stimulateurs cardiaques et les instruments dentaires. Des agents stérilisants modernes tels que le glutaraldéhyde, les dérivés des acides orthophtalique et succinique, les composés contenant de l'oxygène et les dérivés de l'acide peracétique sont utilisés dans les modes de stérilisation express et de "stérilisation classique". Les médicaments qui en sont dérivés sont considérés comme prometteurs - Erigid Forte, Lysoformin-3000, Sidex, NU Sidex, Sidex OPA, Gigasept, Steranios, Secusept Active, Secusept Pulver ”, “Anioxide 1000”, “Clindesin forte”, “Clindesine oxy”, et résumant la justification économique de l'utilisation de ces médicaments, il convient de conclure qu'ils sont inégaux, ce qui est déterminé par le moment de l'utilisation des solutions de travail (par exemple, de tous les médicaments, seul «Erigid forte» a la possibilité d'utilisation de la solution de travail pendant 30 jours pour une stérilisation "classique").
Les produits détachables sont stérilisés non assemblés. Afin d'éviter une violation de la concentration des solutions de stérilisation, les produits qui y sont immergés doivent être secs. Le cycle de traitement est de 240 à 300 minutes, ce qui est un inconvénient important de la méthode. De plus, l'inconvénient est le coût élevé des désinfectants. L'avantage est qu'il n'y a pas d'équipement spécial. Les produits stériles lavés après avoir retiré le liquide des canaux et des cavités sont utilisés immédiatement pour leur destination ou après emballage dans un calicot de coton stérile à deux couches, placé dans une boîte stérile doublée d'une feuille stérile pendant une période ne dépassant pas 3 jours .
Tous les travaux de stérilisation des produits sont effectués dans des conditions aseptiques dans des salles spéciales préparées comme une unité opératoire (quartz, nettoyage de printemps). Le personnel utilise des combinaisons stériles, des gants, des lunettes. Le rinçage des produits est effectué dans 2-3 changements d'eau stérile, 5 minutes chacun.
Contrôle de l'efficacité de la stérilisation
L'efficacité de la stérilisation est contrôlée par des méthodes physiques, chimiques et bactériologiques.
Les méthodes physiques de contrôle comprennent : la mesure de la température, de la pression et du temps d'application de la stérilisation.
Pendant des décennies, des produits chimiques ont été utilisés pour le contrôle chimique qui ont un point de fusion proche de la température de stérilisation. Ces substances étaient : l'acide benzoïque - pour la stérilisation à la vapeur ; saccharose, hydroquinone et quelques autres - pour contrôler la stérilisation de l'air. S'il y avait une fusion et une décoloration de ces substances, le résultat de la stérilisation était considéré comme satisfaisant. L'utilisation des indicateurs ci-dessus n'étant pas suffisamment fiable, des indicateurs chimiques ont maintenant été introduits dans la pratique du contrôle des méthodes de stérilisation thermique, dont la couleur change sous l'influence d'une température adéquate pour un mode particulier pendant un certain temps nécessaire à la mise en œuvre ce mode. En changeant la couleur des indicateurs, les principaux paramètres de stérilisation sont jugés - la température et la durée de la stérilisation. Depuis 2002, GOST RISO 11140-1 « Stérilisation des produits médicaux. Indicateurs chimiques. Exigences générales », dans lesquelles les indicateurs chimiques sont divisés en six classes :
À 1ère classe des indicateurs externes et processus interne, qui sont placés sur la surface extérieure de l'emballage avec des dispositifs médicaux ou à l'intérieur d'ensembles d'instruments et de linge chirurgical. Un changement de couleur de l'indicateur indique que l'emballage a subi un processus de stérilisation.
Co. 2e année comprennent des indicateurs qui ne contrôlent pas les paramètres de stérilisation, mais sont destinés à être utilisés dans des tests spéciaux, par exemple, sur la base de tels indicateurs, ils évaluent l'efficacité de la pompe à vide et la présence d'air dans la chambre du stérilisateur à vapeur.
À 3e année inclure des indicateurs qui déterminent un paramètre de stérilisation, par exemple, la température minimale. Cependant, ils ne renseignent pas sur le temps d'exposition à la température.
À 4e année comprennent des indicateurs multiparamètres qui changent de couleur lorsqu'ils sont exposés à plusieurs paramètres de stérilisation. Un exemple de tels indicateurs sont les indicateurs de stérilisation à la vapeur et à l'air à usage unique IKPVS-"Medtest".
À 5e année comprennent l'intégration d'indicateurs qui répondent à tous les paramètres critiques de la méthode de stérilisation.
À 6ème année inclure des indicateurs-émulateurs. Les indicateurs sont calibrés en fonction des paramètres des modes de stérilisation dans lesquels ils sont utilisés. Ces indicateurs répondent à tous les paramètres critiques de la méthode de stérilisation. Les indicateurs d'émulation sont les plus modernes. Ils enregistrent clairement la qualité de la stérilisation avec le bon rapport de tous les paramètres - température, vapeur saturée, temps. Si l'un des paramètres critiques n'est pas respecté, l'indicateur ne fonctionne pas. Parmi les indicateurs de thermo-temps domestiques, les indicateurs "IS-120", "IS-132", "IS-160", "IS-180" de la société "Vinar" ou les indicateurs de vapeur ("IKPS-120/45", " IKPS-132/20") et stérilisation à l'air ("IKPVS-180/60" et "IKVS-160/150") des IKVS à usage unique de la société Medtest.
Règles de base pour l'utilisation des indicateurs de stérilisation à la vapeur et à l'air à usage unique IKPVS-"Medtest"
Toutes les opérations avec indicateurs - extraction, évaluation des résultats - sont effectuées par le personnel effectuant la stérilisation.
L'évaluation et la comptabilisation des résultats de contrôle sont effectuées en évaluant les changements de couleur de l'état initial de l'étiquette de l'indicateur thermique de chaque indicateur, en comparant avec l'étiquette de couleur de la norme de comparaison.
Si la couleur de l'état final de l'étiquette de l'indicateur thermique de tous les indicateurs correspond à l'étiquette de couleur de la norme de comparaison, cela indique que les valeurs requises des paramètres du mode de stérilisation dans la chambre de stérilisation sont respectées.
Les différences d'intensité de la profondeur de couleur de l'étiquette de l'indicateur thermique des indicateurs sont autorisées, en raison de l'inégalité des valeurs de température admissibles dans les différentes zones de la chambre de stérilisation. Si l'étiquette d'indicateur thermique d'au moins un indicateur conserve complètement ou partiellement une couleur qui se distingue facilement de la couleur de l'état de référence, cela indique que les valeurs requises des paramètres du mode de stérilisation dans la chambre de stérilisation ne sont pas respectées.
Les indicateurs et les normes de comparaison doivent correspondre dans les numéros de lot. Il est interdit d'évaluer les résultats du contrôle de stérilisation à l'aide d'indicateurs de lots différents.
L'évaluation de la conformité du changement de couleur de l'étiquette indicatrice thermique par rapport à la Norme est effectuée à un éclairement d'au moins 215 lux, ce qui correspond à une lampe à incandescence mate de 40 W, à une distance d'au plus supérieure à 25 cm Pour le contrôle bactériologique, on utilise actuellement des biotests qui disposent d'une quantité dosée de spores de la culture testée. La méthode existante permet d'évaluer l'efficacité de la stérilisation au plus tôt après 48 heures, ce qui ne permet pas l'utilisation de produits déjà stérilisés tant que les résultats du contrôle bactériologique ne sont pas obtenus.
Un indicateur biologique est une préparation de micro-organismes pathogènes sporulés connus pour être très résistants à ce type de procédé de stérilisation. Le but des indicateurs biologiques est de confirmer la capacité du processus de stérilisation à tuer les spores microbiennes résistantes. C'est le test le plus critique et le plus fiable du processus de stérilisation. Les indicateurs biologiques sont utilisés comme contrôle de charge : si le résultat est positif (croissance microbienne), alors cette charge ne peut pas être utilisée et toutes les charges précédentes doivent être rappelées jusqu'au dernier résultat négatif. Pour obtenir une réponse biologique fiable, seuls les indicateurs biologiques conformes aux normes internationales EC 866 et ISO 11138/11135 doivent être utilisés. Lors de l'utilisation d'indicateurs biologiques, certaines difficultés surgissent - la nécessité d'un laboratoire microbiologique, d'un personnel qualifié, la durée d'incubation dépasse plusieurs fois la durée de la stérilisation, la nécessité de mettre en quarantaine (impossibilité d'utilisation) des produits stérilisés jusqu'à l'obtention des résultats. En raison des difficultés ci-dessus d'application de la méthode biologique dans la pratique dentaire ambulatoire, des méthodes physiques et chimiques sont couramment utilisées pour contrôler l'efficacité de la stérilisation.
ÉVALUATION DE L'EFFICACITÉ DE L'ACTION DES ANTISEPTIQUES ET DES DÉSINFECTANTS. DÉTERMINATION DE LA SENSIBILITÉ DES BACTÉRIES AUX MÉDICAMENTS ANTIMICROBIENS
Introduction. La destruction des microbes pathogènes pour l'homme est l'un des problèmes les plus importants dans la prévention et le traitement des diverses maladies. Pour lutter contre les microbes, des méthodes d'asepsie, d'antiseptiques, de désinfection et de thérapie antimicrobienne sont utilisées. Chaque méthode a ses propres objectifs et conditions d'application.
Sujet 7.1. MÉTHODES D'ÉVALUATION DE L'EFFET ANTIMICROBIEN DES FACTEURS CHIMIQUES ET PHYSIQUES
Introduction.Asepsie - un système de mesures qui empêchent l'introduction (la pénétration) de micro-organismes de l'environnement dans les tissus ou les cavités du corps humain lors de manipulations médicales et diagnostiques, ainsi que dans le matériel de recherche, en média culturel et des cultures de micro-organismes dans des études de laboratoire. L'asepsie prévoit le respect de règles et de méthodes de travail sanitaires et hygiéniques spéciales, ainsi qu'un traitement spécial des outils, des matériaux, des mains du personnel médical, des locaux, etc. à des fins de destruction partielle (désinfection) ou complète (stérilisation) des microbes.
Antiseptiques- un ensemble de mesures thérapeutiques et préventives visant à détruire les micro-organismes pouvant provoquer un processus infectieux dans les zones endommagées de la peau et des muqueuses en les traitant avec des substances microbicides - antiseptiques.
Stérilisation- destruction complète des micro-organismes, y compris les formes végétatives et les spores. Il existe 3 grands groupes de méthodes de stérilisation : physique, mécanique et chimique. Le choix de la méthode utilisée pour résoudre un problème pratique dépend de l'objet à stériliser.
Désinfection- désinfection des objets environnementaux. Contrairement à la stérilisation, la désinfection entraîne la mort de la plupart des formes de microbes, mais pas de toutes, et ne fournit donc qu'une réduction de la contamination microbienne (contamination), et non une décontamination complète de l'objet. Par conséquent, les objets qui ont été désinfectés ne sont pas absolument sûrs.
▲ Planifier
▲ Programme
1. Aseptique, antiseptique et désinfectant. Antiseptiques et désinfectants.
2. Action antimicrobienne des facteurs physiques et chimiques.
3. Méthodes de stérilisation ; appareil utilisé pour la stérilisation.
4. Méthodes de contrôle de l'efficacité de la stérilisation, de l'action des antiseptiques et des désinfectants.
Manifestation
1. Appareils utilisés pour la stérilisation : autoclave, étuve, appareils de filtration et d'irradiation UV.
ET La tâcheélèves
1. Prendre en compte les résultats d'expériences réalisées avec des objets de test bactériens pour contrôler l'efficacité de la stérilisation réalisée par ébullition et autoclavage. Pour conclure.
2. Déterminez l'effet antibactérien des rayons UV sur les staphylocoques et Escherichia coli à l'aide de cultures prêtes à l'emploi.
3. Tenir compte des résultats des expériences mises en place pour déterminer l'effet antimicrobien des substances antiseptiques et désinfectantes. Pour conclure.
Des lignes directrices
Méthodes de stérilisation
I. Méthodes physiques. Exposition à des températures élevées. Une température élevée a un effet microbicide en raison de sa capacité à provoquer la dénaturation des biopolymères les plus importants, principalement les protéines.
Stérilisation par chaleur sèche dans une armoire de séchage et de stérilisation (fours Pasteur) est basé sur l'effet bactéricide de l'air chauffé à 165-170°C pendant 45 minutes. À une température plus élevée, il se produit une carbonisation des bouchons de coton, du papier dans lequel la vaisselle est enveloppée, et à une température plus basse, une longue période de stérilisation est nécessaire. La chaleur sèche stérilise la verrerie (boîtes de Pétri, éprouvettes, pipettes, etc.).
Autoclavage- Stérilisation à la vapeur surchauffée (à haute pression) dans un stérilisateur à vapeur (autoclave). Un des plus méthodes efficaces stérilisation, qui est largement utilisée non seulement en microbiologie, mais aussi en pratique clinique. Travailler avec un autoclave nécessite une exécution précise instruction spécifique et le respect des règles de sécurité. La température maximale de la vapeur est mesurée à l'aide d'un thermomètre spécial, qui est placé dans l'autoclave avec le matériel à stériliser. Dans certains cas, des produits chimiques à point de fusion spécifique sont utilisés : benzonaphtol (PO °C), acide benzoïque (120 °C). De nombreux milieux nutritifs, pansements, linge sont stérilisés à une pression de 1 atm pendant 15 à 20 minutes, des milieux nutritifs contenant des glucides à 0,5 atm pendant 15 minutes et la désinfection du matériel infecté est effectuée à 1,5-2 atm pendant 20 à 25 min. (Tableau 7.1.1).
Tableau 7.1.1. Relation entre pression, température et durée de stérilisation dans un stérilisateur à vapeur (autoclave)
0 100 30-60 (fractionnel) 0,5 111 20-30
1 121 15-20 1,5 127 15-20
Stérilisation à la vapeur effectué dans un autoclave avec un couvercle dévissé et un robinet de sortie ouvert. Cette méthode de stérilisation est basée sur l'effet antibactérien de la vapeur sur les cellules végétatives. Il est utilisé dans les cas où le matériel à stériliser ne peut pas supporter des températures élevées, comme les milieux nutritifs avec des vitamines, des glucides. Pour une décontamination complète, le principe de la stérilisation fractionnée est utilisé, c'est-à-dire le matériel est stérilisé à 100 "C (ou 80-90 °C) pendant 20-30 minutes pendant 3 jours consécutifs. Dans ce cas, les cellules végétatives meurent et les spores restent et germent en 1 jour. Double chauffage ultérieur assure une stérilité suffisamment fiable du matériel.
Tyndalisation - il s'agit d'une stérilisation fractionnée de matériaux à 56-58 "C pendant 1 heure 5-6 jours consécutifs. Il est utilisé pour la stérilisation de substances facilement détruites à haute température (sérum sanguin, vitamines, etc.).
Allumage dans la flamme réchaud à alcool ou brûleur à gaz
Le changement est limité, par exemple, pour la stérilisation des anses bactériologiques, des aiguilles à dissection, des pincettes.
Exposition aux rayonnements ionisants. L'effet microbicide des rayonnements ionisants est basé sur leur capacité à endommager la molécule d'ADN. Pour la stérilisation d'instruments médicaux jetables et d'équipements bactériologiques sensibles aux effets thermiques (plats en plastique pour la culture de microbes et de cultures cellulaires, seringues en plastique, systèmes de transfusion sanguine, etc.), la stérilisation par rayonnement γ est généralement utilisée.
I. Méthodes mécaniques. Ils sont basés sur la filtration à travers des membranes filtrantes spéciales à pores de petite taille, capables de retenir mécaniquement les micro-organismes. Les filtres en papier et en polymère sont largement utilisés dans la pratique de laboratoire. Il existe des filtres avec des pores de différentes tailles strictement calibrées, ce qui vous permet de garantir la purification du matériau non seulement des bactéries, mais également des virus et, si nécessaire, de certaines macromolécules. La filtration est utilisée pour la stérilisation matières liquides qui ne résistent pas à la chaleur (sérum sanguin, solutions antimicrobiennes, composants de milieux nutritifs pour bactéries et cultures cellulaires), pour obtenir des toxines bactériennes et autres déchets de bactéries. La filtration est la principale méthode de stérilisation de l'air en cas de besoin. Pour ce faire, l'air passe à travers des filtres imprégnés de microbicides. De tels systèmes de stérilisation sont utilisés, par exemple, dans les boîtes de bureau pour travailler avec des agents pathogènes d'infections particulièrement dangereuses, ainsi que dans les salles d'opération, les maternités, etc.
III. Méthodes chimiques. Ils reposent sur le traitement d'un objet avec des produits chimiques à effet microbicide et capables, sous réserve de certains modes d'exposition, d'assurer la destruction complète de la microflore. La stérilisation chimique est généralement utilisée pour traiter divers dispositifs et instruments réutilisables sensibles aux hautes températures (dispositifs à fibres optiques, implants médicaux, etc.). Les agents stérilisants comprennent l'oxyde d'éthylène, le peroxyde d'hydrogène, le glutaraldéhyde, l'acide peroxyacétique, le dioxyde de chlore.
Quelle que soit la méthode, un contrôle régulier de l'efficacité de la procédure de stérilisation est requis dans tous les cas. À cette fin, des indicateurs biologiques sont utilisés - des micro-organismes connus qui sont les plus résistants à cette méthode de traitement (par exemple, les spores Bacillus stearothermophilus contrôler l'efficacité de l'autoclavage, Bacillus subtilis- pour contrôler la stérilisation à la chaleur sèche). Il existe également des indicateurs physico-chimiques - des substances qui subissent des
mes modifications (changement de couleur, état d'agrégation, etc.) uniquement si le bon mode de traitement est respecté.
Méthodes de désinfection
Des méthodes physiques et chimiques sont utilisées pour la désinfection.
I. Méthodes physiques. Exposition à des températures élevées
tour.
Ébullition. Les seringues, les petits instruments chirurgicaux, les lamelles de verre et les lamelles couvre-objets et certains autres articles sont placés dans des stérilisateurs dans lesquels de l'eau est versée. Pour éliminer la dureté et augmenter le point d'ébullition, une solution de bicarbonate de sodium à 1-2% est ajoutée à l'eau. L'ébullition est effectuée pendant au moins 30 minutes. Lorsqu'ils sont bouillis, certains virus (par exemple, le virus de l'hépatite B) et les spores bactériennes restent viables.
Pasteurisation basé sur l'effet antibactérien de la température sur les cellules végétatives, mais pas sur les spores bactériennes. Le matériau est chauffé à une température de 50 à 65 "C pendant 5 à 10 minutes, suivi d'un refroidissement rapide. Habituellement, les boissons et les produits alimentaires (vin, bière, jus, lait, etc.) sont pasteurisés.
Exposition aux rayonnements ionisants. rayonnement ultraviolet(UV) avec une longueur d'onde de 260-300 microns a un effet microbicide assez prononcé, cependant, certains types de microbes et de spores sont résistants aux UV. Par conséquent, l'irradiation UV n'est pas en mesure d'assurer la destruction complète de la microflore - la stérilisation de l'objet. Le traitement UV est généralement utilisé pour la désinfection partielle (désinfection) de grands objets : surfaces d'objets, chambres, air dans les établissements médicaux, laboratoires de microbiologie, etc.
Rayonnement gamma a un effet microbicide prononcé sur la plupart des micro-organismes, y compris les formes végétatives de bactéries et les spores de la plupart des espèces, champignons, virus. Utilisé pour stériliser les plats en plastique et les instruments médicaux jetables. Il convient de garder à l'esprit que le traitement par rayonnement gamma n'assure pas la destruction des agents infectieux tels que les prions.
II. Méthodes chimiques. C'est le traitement d'un objet désinfecté
tami - produits chimiques microbicides. Quelque
certains de ces composés peuvent avoir des effets toxiques
sur le corps humain, ils sont donc utilisés exclusivement
Pour le traitement d'objets externes. Comme désinfectant
utilisent généralement du peroxyde d'hydrogène, contenant du chlore
unité (solution d'eau de Javel 0,1-10 %, solution 0,5-5 %
chloramine, 0,1-10
% de solution d'un sel basique aux deux tiers d'hypo-
Chlorate de calcium - DTSGK), formaldéhyde, phénols (solution à 3-5% de phénol, lysol ou acide carbolique), iodophores. Le choix du désinfectant et sa concentration dépendent du matériel à désinfecter. La désinfection peut suffire à décontaminer uniquement les instruments médicaux qui ne traversent pas les barrières naturelles de l'organisme (laryngoscopes, cystoscopes, ventilateurs). Certaines substances ( acide borique, merthiolate, glycérine) sont utilisés comme conservateurs pour la préparation de sérums thérapeutiques et diagnostiques, de vaccins et d'autres médicaments.
Méthodes antiseptiques
En tant qu'antiseptiques, seuls des composés peu toxiques pour l'organisme et ayant un effet antimicrobien sont utilisés. Le plus couramment utilisé 70 % éthanol, solution d'iode à 5%, solution de KMp0 4 à 0,1%, solutions alcooliques à 0,5-1% de bleu de méthylène ou de vert brillant, solution de chlorhexidine à 0,75-4,0%, solution d'hexachlorophène à 1-3% et quelques autres connexions. Des agents antimicrobiens sont également ajoutés aux matériaux utilisés dans la fabrication de pansements, de pansements adhésifs, de prothèses dentaires, de matériaux de remplissage, etc. afin de leur conférer des propriétés bactéricides.
Méthodes de contrôle de l'efficacité de la stérilisation, de l'action des antiseptiques et des désinfectants. Etude de l'action antibactérienne des hautes températures. Placez les fils de soie humidifiés avec un mélange de cultures sporulées (3 tubes à essai) et non sporulées (3 tubes à essai) dans des tubes à essai avec un bouillon nutritif. Autoclaver ou faire bouillir un tube avec chaque culture ; N'exposez les tubes de contrôle à aucun impact. Après traitement, conservez toutes les cultures dans un thermostat à 37 ° C pendant 24 heures.Marquez le résultat de l'expérience et tirez une conclusion.
Contrôle de la stérilité des pansements et des instruments chirurgicaux. Les échantillons à tester (ou écouvillons de la surface des gros instruments) sont ensemencés sur trois milieux : bouillon sucré, milieu thioglycol et milieu liquide de Sabouraud. Les cultures sont incubées dans un thermostat pendant 14 jours. En l'absence de croissance dans toutes les cultures, le matériel est considéré comme stérile.
Etude de l'action antibactérienne des rayons UV. Suspension de staphylocoque ou E. coli dans une solution isotonique de chlorure de sodium dans un volume de 1 ml, placer à une distance de 10-20 cm du centre de la lampe. Inoculer les suspensions bactériennes irradiées et non irradiées (contrôle) dans un bouillon nutritif et incuber
à 37°C pendant 16-24 heures, après quoi évaluer les résultats : l'absence de turbidité du milieu est associée à la mort de la culture bactérienne irradiée, une turbidité est notée dans le témoin, ce qui indique la présence de croissance.
Détermination de l'action antimicrobienne des antiseptiques et des désinfectants. 1. Préparez deux types d'objets de test : a) des fils de soie trempés dans la culture E. coli; b) fils de soie humidifiés avec une culture sporulée (avec une forte teneur en spores). Les fils sont placés dans des solutions de phénol (5%), de lysol (5%), d'eau de Javel (10%) pendant 5 et 60 minutes, puis lavés des substances à tester, semés dans un bouillon nutritif et placés dans un thermostat jusqu'au lendemain . Contrôles des actions substances chimiques ne pas soumettre. Notez le résultat de l'expérience et tirez une conclusion.
2. Humidifiez des disques de papier filtre avec des solutions de substances d'essai et placez-les à la surface de la gélose nutritive dans une boîte de Pétri ensemencée (avec une pelouse) avec une culture d'essai de staphylocoques ou d'Escherichia coli. Incuber la boîte pendant 24 heures à 37°C. L'action antibactérienne des substances étudiées est jugée par le diamètre des zones d'inhibition de la croissance bactérienne formées autour des disques.
Sujet 7.2. MÉTHODES D'ÉVALUATION DE L'EFFICACITÉ DE L'ACTION DES MÉDICAMENTS ANTIMICROBIENS
Introduction. Les antimicrobiens (antibiotiques naturels et synthétiques) sont utilisés pour traiter les maladies causées par des micro-organismes. Pour une thérapie efficace, il est nécessaire de sélectionner un médicament qui a la plus grande activité par rapport à cet agent infectieux et qui a moindre mal microflore humaine normale. La large répartition des souches bactériennes plus ou moins résistantes à de nombreux médicaments (multirésistance) rend l'évaluation qualitative (méthode des disques) et quantitative (méthode des dilutions en série) de la sensibilité bactérienne aux médicaments thérapeutiques particulièrement pertinente.
▲ Programme
1. Spectres d'action des principaux groupes de médicaments antimicrobiens.
2. Évaluation de l'effet des médicaments antimicrobiens sur les bactéries par la méthode du disque.
3. Détermination de la concentration minimale inhibitrice (CMI) des médicaments antimicrobiens par la méthode des dilutions en série.
ET. Manifestation
1. Antimicrobiens de divers groupes.
2. Disques en papier standard imprégnés d'agents antimicrobiens pour déterminer la sensibilité des bactéries à ceux-ci.
3. Tableaux et schémas des spectres antimicrobiens des groupes d'antibiotiques les plus importants et des mécanismes de leur action antibactérienne.
Affectation aux étudiants
1. Mettre en place une expérience pour déterminer la sensibilité des staphylocoques à divers antibiotiques en utilisant la méthode du disque.
2. Sur la base des résultats de l'expérience, déterminer la concentration minimale inhibitrice de pénicilline pour diverses cultures bactériennes par la méthode des dilutions en série.
Des lignes directrices
Détermination quantitative de la sensibilité des bactéries aux médicaments antimicrobiens par la méthode des dilutions en série Cette méthode est utilisée pour déterminer la concentration minimale inhibitrice (MPC) - la concentration la plus faible d'un antibiotique qui supprime complètement la croissance des bactéries étudiées. Une solution mère antibiotique est préparée contenant le médicament à une certaine concentration (μg / ml ou U / ml) dans une solution physiologique ou tampon ou dans un solvant spécial. La solution mère est utilisée pour préparer des dilutions en série (2 fois) de l'antibiotique dans un milieu nutritif - bouillon (dans un volume de 1 ml) ou gélose. A partir de la culture bactérienne étudiée, une suspension de densité standard est préparée et ensemencée dans 0,1 ml sur des milieux avec différentes concentrations de l'antibiotique, ainsi que sur un milieu sans médicament (témoin de culture). Les cultures sont incubées à 37°C pendant 20 à 24 heures ou plus (pour les bactéries à croissance lente), après quoi les résultats de l'expérience sont notés pour l'opacification du bouillon nutritif ou l'apparition d'une croissance visible de bactéries sur la gélose, par rapport avec le témoin pris comme IPC.
la concentration la plus élevée du médicament qui empêche le développement du CPP ou l'accumulation d'antigènes pathogènes dans les cellules est considérée comme la CMI.
Interprétation des résultats, c'est-à-dire évaluation de la sensibilité clinique, réalisée sur la base des critères indiqués dans le tableau. 7.2.1. Les souches sensibles comprennent les souches bactériennes dont la croissance est inhibée aux concentrations du médicament trouvées dans le sérum sanguin du patient lors de l'utilisation de doses thérapeutiques moyennes d'antibiotiques. Les souches modérément résistantes comprennent les souches dont la suppression de la croissance nécessite des concentrations qui sont créées dans le sérum sanguin lorsque les doses thérapeutiques maximales du médicament sont administrées. Les micro-organismes sont résistants, dont la croissance n'est pas supprimée par le médicament à des concentrations créées dans le corps lors de l'utilisation des doses maximales autorisées.
Tableau 7.2.1. Interprétation les résultats de la détermination de la sensibilité des bactéries aux antibiotiques par la méthode des dilutions en série
| Antibiotique | CMI (mcg/ml) | ||
| ressentir- | intermédiaire | écurie- | |
| corps | précis | chiche | |
| (S) | (RÉ | (R) | |
| Pénicillines | |||
| Benzylpénicilline : | |||
| pour staphylocoques | 0,12 £ | - | >0,25 |
| pour les autres bactéries | <1,5 | >1,5 | |
| Oxacilline | |||
| pour Staphylococcus aureus | <2 | - | >4 |
| pour les autres types de staphylocoques | <0,25 | - | >0,5 |
| Méticilline | <2 | - | >4 |
| Ampicilline : | |||
| pour staphylocoques | <0,25 | - | >0,5 |
| pour E. coli et autres entérobactéries | <8 | >32 | |
| Carbenicilline : | |||
| pour E. coli et autres entérobactéries | <16 | >64 | |
| pour Pseudomonas aeruginosa | <128 | >512 | |
| Pipéracilline | |||
| pour E. coli et autres entérobactéries | <16 | >64 | |
| pour Pseudomonas aeruginosa | >64 | - | >182 |
| Azlocilline | <64 | - | >128 |
| Céphalosporines | |||
| Céfazoline | <8 | >32 | |
| Céphalotine | <8 | >32 | |
| Céfaclor | <8 | >32 | |
| Céfalexine | <8 | >32 | |
| Céfuroxime | <8 | >32 |
Continuation
intermédiaire (RÉ
| Céfamandol | <8 | >32 | ||
| Céfotaxime | <8 | 16-32 | >64 | |
| Ceftriaxone | <8 | 16-32 | >64 | |
| Céfopérazone | <16 | >64 | ||
| Ceftazidime | <8 | >32 | ||
| céfépime | Nouvelle version bêta | <8 -лактамы | >32 | |
| Imipénème | <4 | >16 | ||
| Méropénem | <4 | >16 | ||
| Quinolones | ||||
| Acide nalidixique | SI6 | - | >32 | |
| Ciprofloxacine | <1 | >4 | ||
| Ofloxacine | <2 | >8 | ||
| Norfloxacine | <4 юзиды | >16 | ||
| Aminogli | ||||
| Kanamycine | <16 | >64 | ||
| Gentamicine | <4 | >16 | ||
| Tobramycine | <4 | >16 | ||
| Amikacine | <16 | >64 | ||
| Netilmicine | <8 | >32 | ||
| Tétracyclines, macrolides, lincosamides | ||||
| Tétracycline | <2 | 4-8 | >16 | |
| Doxycycline | <4 | >16 | ||
| Érythromycine | 50,5 | 1-4 | >8 | |
| Azithromycine | <2 | >8 | ||
| Clarithromycine | <2 | >8 | ||
| Aléandomycine | <2 | >8 | ||
| Lincomycine | <2 | >8 | ||
| Clindamycine | <0,25 | 0,5 | >1 | |
| Antibiotiques d'autres groupes | ||||
| Chloramphénicol (lion | omycétine) | <8 | >32 | |
| Acide fusidique | <2 | 4-8 | >16 | |
| Rifampicine | <2 | >8 | ||
| Polymyxine | <50 ЕД/мл | >50 U/ml | ||
| Vancomycine | <4 | 8-16 | S32 | |
| Furadonine | <32 | >128 |
Systèmes de microtest pour déterminer la sensibilité aux médicaments antimicrobiens. Les systèmes de microtest sont conçus pour déterminer rapidement la sensibilité clinique aux antibiotiques des bactéries de certaines espèces ou groupes apparentés. Les médicaments testés à des concentrations standard se trouvent dans les puits de plaques en plastique prêtes à l'emploi. La sensibilité de la culture étudiée à deux concentrations de chaque antibiotique est déterminée : la moyenne thérapeutique et la maximale. Le matériel d'une colonie isolée est introduit dans 5 ml d'un milieu nutritif standard contenant un indicateur à l'aide d'une boucle bactériologique de mesure (volume 1 μl), et une suspension est préparée. La suspension bactérienne préparée est versée dans les puits du comprimé par 0,1 ml et incubée dans les conditions de température et de composition gazeuse du milieu optimales pour ce type de bactéries. La croissance des bactéries est jugée par le changement de couleur de l'indicateur, ce qui peut réduire considérablement la durée de l'étude. Si les bactéries restent viables en présence d'un antibiotique, la libération de produits métaboliques entraîne une modification de la couleur de l'indicateur. L'absence de changement de couleur indique la suppression complète de l'activité vitale du microbe. Les résultats sont déterminés après 4 heures d'incubation à l'aide d'un spectrophotomètre.
Détermination de la sensibilité clinique des bactéries aux médicaments antimicrobiens par la méthode du disque (test de diffusion). La méthode est basée sur la suppression de la croissance bactérienne sur un milieu nutritif dense sous l'action d'un antibiotique contenu dans un disque de papier. À la suite de la diffusion du médicament dans la gélose, un gradient de concentration de l'antibiotique se forme autour du disque. La taille de la zone d'inhibition de la croissance dépend de la sensibilité de la bactérie et des propriétés du médicament (en particulier, la vitesse de diffusion dans la gélose). Pour déterminer la sensibilité dans la pratique clinique, des disques standard prêts à l'emploi avec un contenu strictement défini d'antibiotiques sont utilisés. Le contenu du médicament est déterminé en fonction des concentrations thérapeutiques de chaque antibiotique et des valeurs moyennes de la CMI pour les bactéries pathogènes. Le nom du médicament et sa quantité sont indiqués sur chaque disque. Pour déterminer la sensibilité, une suspension contenant un nombre standard de cellules viables est préparée à partir de la culture bactérienne étudiée et ensemencée avec un tapis en boîtes de Pétri (diamètre 100 mm) sur milieu Muller-Hinton ou AGV (milieu spécial qui n'empêche pas la diffusion de substances antimicrobiennes et n'ont pas d'effet négatif sur celles-ci). Les disques sont appliqués sur la surface ensemencée à l'aide d'un applicateur à une distance de 2,5 cm du centre de la boîte en cercle (Fig. 7.2.1). Pas plus de 5 disques sont placés sur la tasse. Les cultures sont incubées pendant 18 à 20 heures à 35 C. Si la procédure est effectuée correctement, sur fond de pelouse bactérienne uniforme autour des disques,
Zones d'inhibition de la croissance, ayant une forme ronde. La prise en compte des résultats est réalisée en mesurant le diamètre de la zone d'inhibition de croissance. Pour la zone à mesurer, prenez la zone où la croissance des bactéries est complètement absente. L'interprétation des résultats obtenus (la conclusion sur la sensibilité) est effectuée sur la base des critères donnés dans le tableau. 7.2.2.
Tableau 7.2.2. Interprétation des résultats de la détermination de la sensibilité des bactéries aux antibiotiques par la méthode des disques (sur milieu AGV)
Pénicillines
| Benzylpénicilline : | ||||
| lors du test des staphylocoques | 20 £ | 21- | -28 | >29 |
| lors du test d'autres bactéries | 10 £ | 11- | -16 | 17 £ |
| Ampicilline : | ||||
| lors du test des staphylocoques | <20 | 21- | -28 | 29 £ |
| lorsqu'il est testé Gram négatif | ||||
| ny bactéries et entérocoques | <9 | 10- | -13 | >14 |
| Carbenicilline (25 mcg) | 14 £ | 15- | -18 | >19 |
| Carbenicilline (100 mcg) à | ||||
| test P. aeruginosa | 11 £ | 12- | -14 | 15 £ |
| Méticilline | 13 £ | 14- | -18 | >19 |
| Oxacilline (10 mcg) | $15 | 16- | -19 | 20 £ |
| Azlocilline (pour P.aeruginosa) | 13 £ | 14- | -16 | 16 £ |
| Pipéracilline (pour P.aeruginosa) | <17 | >18 | ||
| Aztréonam | <15 | 16- | -21 | 22 £ |
Céphalosporines
Continuation
| Antibiotique | Diamètre | zones de retard de croissance | |
| (mm) | |||
| ressentir- | intermédiaire | écurie- | |
| corps | précis | chiche | |
| (S) | (RÉ | (R) | |
| Nouveaux bêta-lactamines | |||
| Imipénème*<13 | 14-15 | >16 | |
| Méropénème*<13 | 14-15 | >16 | |
| Quinolones | |||
| Ciprofloxacine<15 | 16-20 | >21 | |
| Ofloxacine<12 | 13-16 | >17 | |
| Acide nalidixique*<12 | 13-17 | >18 | |
| Aminoglycosides | |||
| Streptomycine<16 | 17-19 | >20 | |
| Kanamycine<14 | 15-18 | >19 | |
| Gentamicine £15 | - | >16 | |
| Sizomycine<15 | - | >16 | |
| Tobramycine<14 | - | >15 | |
| Amikacine<14 | 15-16 | >17 | |
| Netilmicine<12 | 13-14 | >15 | |
| Tétracyclines, macrolides, lincosamides | |||
| Tétracycline<16 | 17-20 | >22 | |
| Doxycycline<15 | 16-19 | >20 | |
| Érythromycine<17 | 18-21 | >22 | |
| Azithromycine<13 | 14-17 | >18 | |
| Roxithromycine*<14 | 15-18 | >19 | |
| Clarithromycine* £ 13 | 14-17 | >18 | |
| Lincomycine<19 | 20-23 | 24 £ | |
| Clindamycine 14 € | 15-20 | >21 | |
| Oléandomycine £16 | 17-20 | >21 | |
| Antibiotiques d'autres groupes | |||
| Chloramphénicol<15 | 16-18 | >19 | |
| Acide fusidique<16 | 17-20 | >21 | |
| Rifampicine<12 | 13-15 | >16 | |
| Polymyxine<11 | 12-14 | >15 | |
| Vancomycine : | |||
| pour staphylocoques<11 | - | >12 | |
| pour les entérocoques<14 | 15-16 | >17 | |
| Ristomycine<9 | 10-11 | >12 | |
| Furadonine £15 | 16-18 | >19 | |
| Furagine 15 € | 16-18 | >19 |
*Données préliminaires.
L'utilisation de la méthode du disque présente un certain nombre de limitations. La méthode ne convient que pour déterminer la sensibilité des bactéries à croissance rapide qui forment une pelouse homogène dans les 24 heures sur un milieu nutritif dense standard de composition assez simple (Muller-Hinton ou AGW) qui ne contient pas de substances pouvant réduire l'activité d'antibiotiques ou empêcher leur diffusion. Sinon, les informations reçues seront inexactes.
Ainsi, la méthode du disque ne peut pas être utilisée pour déterminer la sensibilité aux antibiotiques de toutes les bactéries à croissance lente et les plus exigeantes, qui comprennent de nombreux agents pathogènes humains. (Mycobacterium spp., Helicobacter spp., Bacteroides spp., Prevotella spp., Brucella spp., Mycoplasma spp. et plein d'autres). Lors de la détermination de la sensibilité de certaines bactéries exigeantes pour lesquelles des tests standard ont été développés (Haemophilus spp., Neisseria spp., certains types de streptocoques), des milieux de culture spéciaux et des critères supplémentaires doivent être utilisés lors de l'interprétation des résultats.
La méthode du disque ne donne pas non plus de résultats fiables lors de la détermination de la sensibilité des bactéries aux préparations qui diffusent mal dans la gélose, par exemple les antibiotiques polypeptidiques (polymyxine, ristomycine).
Détermination quantitative de la sensibilité des bactéries aux médicaments antimicrobiens à l'aide du test E. Le E-test est une variante de la méthode de diffusion qui permet de déterminer la CMI d'un antibiotique. Au lieu de disques, des bandes de polymère standard sont utilisées, préparées à l'aide d'une technologie spéciale (AB BIODISK) et contenant des agents antimicrobiens immobilisés appliqués sous la forme d'un gradient de concentration continu. De l'autre côté de la bande
Tableau 7.2.3. Détermination de la CMI des antimicrobiens par la méthode des dilutions en série
L'E-test a une échelle de valeurs IPC. Lorsque la bandelette est placée à la surface de la gélose, un processus de diffusion contrôlée garantit qu'un gradient de concentration stable du médicament correspondant au tartre est créé dans le milieu nutritif autour de la bandelette. La procédure de détermination de la sensibilité à l'aide du test E est effectuée de la même manière que le test par la méthode du disque. Après l'incubation de la graine, une zone d'inhibition de croissance elliptique se forme autour de la bande. La valeur IPC correspond à l'intersection de la zone elliptique avec la bandelette E-test. Des critères standard sont utilisés pour interpréter les résultats (évaluation de la sensibilité clinique) (tableau 7.2.3).
ECOLOGIE DES MICROORGANISMES
Introduction. L'écologie des micro-organismes est une branche de la microbiologie générale et étudie les relations des micro- et macro-organismes vivant ensemble dans certains biotopes. Dans les habitats naturels (sol, eau, air, organismes vivants), les microbes font partie de diverses biocénoses. L'écologie des microbes qui causent des maladies humaines est déterminée par leur capacité à survivre dans l'environnement extérieur, à changer d'hôte et à persister dans l'organisme hôte dans le contexte de l'action. système immunitaire, et est également liée aux méthodes de leur distribution, de leur transmission et à un certain nombre d'autres facteurs. L'évaluation d'un certain nombre de conditions environnementales est l'une des tâches principales de la microbiologie sanitaire.
La recherche sanitaire et bactériologique sous-tend Travaux pratiques médecins sanitaires et épidémiologistes dans l'évaluation sanitaire et hygiénique des objets environnementaux, des produits alimentaires, des boissons, etc. et jouer un rôle de premier plan dans la prévention des maladies infectieuses. Un objet d'étude important en microbiologie médicale est la microflore normale du corps humain, qui comprend les microbes qui vivent sur la peau, les muqueuses de divers organes (cavité buccale, pharynx, nasopharynx, voies respiratoires supérieures, intestins, en particulier le gros intestin, etc.). Certains d'entre eux sont permanent (obligatoire) habitants du corps humain, autres - temporaire (facultatif ou transitoire). La microflore normale est un système vital de l'organisme qui assure la protection contre de nombreux microbes pathogènes, la maturation et la stimulation du système immunitaire, la production d'un certain nombre de vitamines et d'enzymes impliquées dans la digestion, etc.
La composition qualitative et quantitative de la microflore humaine change tout au long de la vie et dépend du sexe, de l'âge, de l'alimentation, etc. De plus, les fluctuations de la composition de la microflore humaine peuvent être dues à la survenue de maladies et à l'utilisation de médicaments, principalement des antibiotiques et des immunomodulateurs. . L'évaluation de la composition qualitative et quantitative de la microflore du corps humain selon certains indicateurs permet d'identifier sa violation (dysbactériose) et les conséquences qui y sont associées.
Sujet 8.1. MICROFLORE DE L'EAU, DE L'AIR ET DU SOL. MÉTHODES D'ÉTUDE SANITAIRE-BACTÉRIOLOGIQUE DE L'EAU, DE L'AIR ET DU SOL
g Programme
1. Microflore de l'eau, de l'air et du sol.
2. Micro-organismes indicatifs sanitaires et leur signification.
3. Méthodes de détermination de l'indice if, du titre if et du nombre microbien de l'eau.
4. Méthodes de détermination du nombre microbien de l'air.
5. Méthodes de détermination du titre perfringens, du titre coli et de la numération microbienne du sol.
ET Manifestation
1. Examen sanitaire et bactériologique de l'eau par la méthode des filtres à membrane.
2. Examen sanitaire et bactériologique de l'air. L'appareil de Krotov. Croissance de micro-organismes sur MPA dans une boîte de Petri. Croissance de streptocoques hémolytiques sur gélose au sang.
3. Etude sanitaire et bactériologique du sol. Croissance Proteus vulgaris(selon Choukevitch).
une Affectation aux étudiants
1. Évaluer l'état sanitaire et bactériologique de l'eau sur la base des résultats de la détermination du nombre microbien, de l'indice de coli et du titre de coli.
2. Évaluer l'état sanitaire et bactériologique de l'air sur la base des résultats de la détermination du nombre microbien.
3. Évaluer l'état sanitaire et bactériologique du sol sur la base des résultats de la détermination du nombre microbien, du titre coli, du titre perfringens et du titre des bactéries thermophiles.
4. Ensemencer un lavage de la peau des mains sur un milieu glucose-peptone.
▲ Consignes
Méthodes microbiologiques pour l'étude de l'environnement
Pour évaluer l'état sanitaire et hygiénique de divers objets de l'environnement, eau, nourriture, etc., des études sanitaires et bactériologiques sont réalisées, dont le but est de déterminer le danger épidémique. Cependant, la détection directe de microbes pathogènes est associée à un certain nombre de difficultés, principalement en raison de la faible concentration de ces microbes, qui, en règle générale, ne peuvent pas se multiplier dans l'air, l'eau et le sol. Par conséquent, dans la pratique sanitaire et microbiologique, des méthodes indirectes sont utilisées, basées sur la détermination de la contamination microbienne totale de l'un ou l'autre objet et sur la détection de ce que l'on appelle bactéries indicatrices sanitaires(Tableau 8.1.1).
Tableau 8.1.1. Bactéries indicatrices sanitaires de l'environnement et de l'alimentation
| Un objet | Nature de la pollution | Bactéries Indicatives Sanitaires |
| Eau | fécal | Bactéries du groupe Escherichia coli Escherichia coli, Citrobacter freundii, Enterobacter aerogenes, Enterococcus faecalis |
| Le sol | Aussi | Les mêmes bactéries et clostridies (Clostridium perfringens, CI. sporogenes et etc.) |
| Industriel-quotidien- | bactéries thermophiles, Protée | |
| vye (ordures en décomposition) | vulgaire | |
| aliments | fécal | |
| des produits | serrures S. faecalis, P. vulgaris | |
| Goutte-à-goutte oral | Staphylococcus aureus | |
| Articles | fécal | Bactéries du groupe des voies intestinales |
| vie courante | serrures, P. vulgaris, E. faecalis | |
| Goutte-à-goutte oral | S. aureus | |
| Air | Aussi | S. aureus, S. pyogenes |
| Eau, | Industriel | Souches de production de micro- |
| le sol, | robes | |
| air |
Microbes sanitaires indicatifs, indiquant contamination fécale environnement, sont les bactéries du groupe Escherichia coli (CGB). Ils appartiennent à différents genres de la famille Entérobactéries. Les signes diagnostiques différentiels de BGKP sont présentés dans le tableau. 8.1.2. La détection d'E. coli dans tout produit environnemental ou alimentaire est considérée comme l'indicateur le plus fiable de contamination fécale fraîche. Présence de bactéries Citrobactérie et Enterobacter indique une contamination fécale relativement ancienne. La présence de Clostridium perfringens, C. sporogens et autres clostridies dans le sol indique sa contamination fécale, fraîche et ancienne, puisque ces bactéries forment des spores, ce qui leur permet de persister dans l'environnement (en particulier dans le sol) pendant une longue durée. Détection dans des objets environnementaux Enterococcus faecalis indique également leur contamination fécale. Le groupe des bactéries thermophiles comprend des bactéries non apparentées, représentatives de diverses familles pouvant se multiplier à une température de 60 ° C et plus. (Lactobacillus lactis, Streptococcus thermophilus et etc.). Ils ne sont pas des habitants permanents de l'intestin humain et ne servent pas de critères de contamination fécale de l'environnement. Une forte augmentation du nombre de ces bactéries peut indiquer une contamination du sol par des déchets en décomposition, car elles se multiplient dans le fumier et le compost auto-échauffants.
Tableau 8.1.2. Signes diagnostiques différentiels de BGKP
Escherichia Mélanger + - +
coli acides
Citrobactérie Idem + - p + +
freundii
Enterobacter Butane - - + - + +
aérogènes diol
Symboles : (+) - réaction positive, (-) - réaction négative, p - diverses réactions.
Bactéries appartenant au genre Protée (P.vulgaris) etc.) familles les entérobactéries, largement distribué dans la nature. Ces bactéries putréfactives en grand nombre trouvé sur les restes en décomposition d'animaux et de plantes. La détection de ces bactéries dans n'importe quel aliment indique pourriture putride.
Streptocoques hémolytiques (S.pyogenes),étant des habitants de transit du nasopharynx et du pharynx, ils sont excrétés avec des gouttelettes de mucus par des gouttelettes en suspension dans l'air. Les conditions de survie des streptocoques hémolytiques dans l'environnement ne diffèrent pratiquement pas des conditions caractéristiques de la plupart des autres agents pathogènes des infections aéroportées. La détection de streptocoques hémolytiques dans l'air intérieur indique sa possible contamination par des microbes contenus dans le pharynx, le nasopharynx, les voies respiratoires supérieures d'une personne et qui sont les agents responsables d'infections aéroportées. Staphylococcus aureus est un habitant facultatif du nasopharynx, du pharynx, et aussi peau la personne. Sa présence dans l'air intérieur ou sur des objets qui s'y trouvent est un indicateur contamination aéroportée. La détection simultanée de Staphylococcus aureus et de streptocoques hémolytiques indique un degré élevé de pollution de l'air.
Examen sanitaire et bactériologique de l'eau
Détermination du nombre microbien de l'eau. L'eau du robinet est inoculée dans un volume de 1 ml, l'eau des réservoirs ouverts - dans des volumes de 1,0; 0,1 et 0,01 ml. Tous les échantillons sont introduits dans des boîtes de Petri stériles, après quoi ils sont versés avec 10-12 ml de liquide fondu et refroidis à 45-50 ° C de gélose nutritive, qui est soigneusement
Bien mélangé avec de l'eau. Les cultures sont incubées à 37 °C pendant 1 à 2 jours. L'eau des réservoirs ouverts est inoculée en parallèle sur deux séries de coupelles dont l'une est incubée à 37 °C pendant 1 jour, et l'autre pendant 2 jours à 20 °C. Ensuite, le nombre de colonies cultivées à la surface et dans la profondeur du milieu est compté et calculé numération microbienne de l'eau- le nombre de micro-organismes dans 1 ml.
Détermination du titre if et de l'indice if de l'eau. Coli-titre eau - la quantité minimale d'eau (ml) dans laquelle les CGB sont détectés. Coli-index- la quantité de BGKP dans 1 litre d'eau. Ces indicateurs sont déterminés par la méthode de titrage (fermentation) ou la méthode des filtres à membrane.
Méthode de titrage. Différents volumes d'eau sont ensemencés dans un milieu glucose-peptone (eau peptonée à 1 %, solution de glucose à 0,5 %, solution de chlorure de sodium à 0,5 %, indicateur d'Andrède et flotteur), et pour l'ensemencement de grandes quantités (100 et 10 ml), un milieu concentré est utilisé, contenant 10 fois la quantité de ces substances.
L'eau des réservoirs à ciel ouvert est examinée en volumes de 100 ; dix; 1,0 et 0,1 ml. Pour la recherche eau du robinet faire des récoltes de trois volumes de 100 ml, trois volumes de 10 ml et trois volumes de 1 ml. Les inoculations sont incubées pendant 1 jour à 37°C. La fermentation est jugée par la présence de bulles de gaz dans le flotteur. Les échantillons fermentés ou troubles sont cultivés sur milieu Endo. A partir des colonies cultivées, des frottis sont réalisés, colorés selon la méthode de Gram et un test d'oxydase est effectué pour différencier les bactéries du genre Escherichia, Citrobactérie et Enterobacterà partir de bactéries gram-négatives de la famille des Pseudomonadaceae et d'autres bactéries oxydase positive vivant dans l'eau. A cet effet, 2-3 colonies isolées sont retirées de la surface du milieu avec une tige de verre, appliquée d'un trait sur un papier filtre humidifié avec de la di-méthyl-p-phénylènediamine. Avec un test d'oxydase négatif, la couleur du papier ne change pas, avec un test positif, il vire au bleu en 1 min. Les bâtonnets à Gram négatif qui ne forment pas d'oxydase sont à nouveau examinés dans un test de fermentation - ils sont introduits dans de la gélose nutritive semi-liquide avec 0,5 % solution de glucose et incubé à 37 °C pendant 1 jour. À un résultat positif déterminer si le titre et si l'indice selon le tableau statistique. 8.1.3.
Méthode du filtre à membrane. Le filtre à membrane n° 3 est placé dans un entonnoir de Seitz monté dans un flacon Bunsen, qui est relié à une pompe à vide. Les filtres à membrane sont pré-stérilisés par ébullition dans de l'eau distillée. L'eau du réseau d'adduction d'eau et l'eau du puits artésien sont filtrées dans un volume de 333 ml. eau propre d'un réservoir ouvert est filtré dans un volume de 100, 10, 1,0 et 0,1 ml, plus contaminé avant la filtration est dilué avec stérile
Tableau 8.1.3. Détermination de l'indice des bactéries du groupe Escherichia coli dans l'étude de l'eau
Coli-titre
à partir de 3 volumes de 100 ml
l'eau. Ensuite, les filtres sont placés sur la surface du milieu Endo dans des boîtes de Petri, et après incubation à 37°C pendant 1 jour, le nombre de colonies développées typiques de CGB est compté. Les frottis sont préparés à partir de 2-3 colonies rouges, colorées selon la méthode de Gram et l'activité oxydase est déterminée. Pour ce faire, le filtre avec des colonies de bactéries développées dessus est transféré avec une pince à épiler, sans tourner, sur un cercle de papier filtre humidifié avec de la diméthyl-p-phénylènediamine. En présence d'oxydase, l'indicateur vire la colonie au bleu. 2-3 colonies n'ayant pas changé de couleur d'origine sont ensemencées dans un milieu semi-liquide avec une solution de glucose à 0,5 %. Les cultures sont incubées pendant 24 heures à 37°C. En présence de formation de gaz, le nombre de colonies rouges sur le filtre est compté et l'indice de coli est déterminé. Indicateurs normatifs pour boire de l'eau sont données dans le tableau. 8.1.4.
Tableau 8.1.4. Normes d'eau potable (GOST 2874-82)
| la norme |
Indice
Le nombre de microbes dans 1 ml d'eau, pas plus de 100
Le nombre de bactéries du groupe Escherichia coli dans 1 litre d'eau 3
(if-index), pas plus
Pour déterminer le titre Enterococcus faecalis préparer des dilutions d'eau au 10ème. L'eau totale et ses dilutions dans un volume de 1 ml sont ensemencés dans l'un des milieux électifs liquides (KF, poly-
Myxinovaya, etc.), incubés à 37"C pendant 2 jours, après 24 et 48 heures, les ensemencements sont réalisés sur des milieux denses différentiels électifs : gélose KF, gélose TTX (milieu avec chlorure de triphényltétrazolium), gélose polymyxintellurite. Des streptocoques sont identifiés. selon le type de colonies, la morphologie cellulaire et la coloration selon la méthode de Gram.Sur le milieu au TTX, les streptocoques forment des colonies rouge foncé, sur gélose au tellurite - noir.
La composition des médias. Milieu KF : gélose nutritive 2 %, extrait de levure 1 %, lactose 2 %, azide de sodium 0,4 %, carbonate de sodium 0,06 %, indicateur rouge de bromocrésol.
Milieu polymyxine : gélose nutritive 2 %, extrait de levure 1 %, glucose 1 %, polymyxine M 200 unités/ml, indicateur bleu de bromthymol.
Gélose polymyxintellurite : gélose nutritive 2 %, extrait de levure 1 %, glucose 1 %, cristal violet 1:800 000, polymyxine M 200 U/ml, tellurite de potassium 0,01 %.
Gélose au chlorure de triphényltétrazolium (TTC) : 2 % de gélose nutritive, 1 % d'extrait de levure, 1 % de glucose, cristal violet 1:800 000, 0,01 % de TTC.
Lors de la définition d'un index E. faecalis utiliser les tableaux statistiques utilisés pour établir l'indice coli. De plus, la méthode du filtre à membrane est utilisée à cette fin. Pour détecter les bactéries pathogènes, l'eau est passée à travers des filtres à membrane, qui sont ensuite placés dans des milieux électifs liquides ou à la surface de milieux denses de diagnostic différentiel.
Examen sanitaire et bactériologique de l'air
Détermination du nombre microbien de l'air. Les méthodes microbiologiques quantitatives d'étude de l'air reposent sur les principes de la sédimentation (sédimentation), de l'aspiration ou de la filtration.
méthode de sédimentation. Deux boîtes de Pétri avec de la gélose nutritive sont laissées ouvertes pendant 60 minutes, après quoi les cultures sont incubées dans un thermostat à 37°C. Les résultats sont évalués par le nombre total de colonies cultivées sur les deux boîtes : s'il y a moins de 250 colonies, l'air est considéré comme propre ; 250 à 500 colonies indiquent une pollution de degré moyen, avec un nombre de colonies supérieur à 500 - polluées.
méthode d'aspiration. Il s'agit d'une méthode quantitative plus précise pour déterminer la numération microbienne de l'air. L'ensemencement aérien est effectué à l'aide d'appareils. L'appareil de Krotov (Fig. 8.1.1) est conçu de manière à ce que l'air soit aspiré à une vitesse donnée à travers une fente étroite d'une plaque de plexiglas qui ferme la boîte de Pétri avec de la gélose nutritive.
Fig.8.1.1. Appareil Krotov pour la recherche bactériologique
Dans le même temps, les particules d'aérosol contenant des micro-organismes sont fixées uniformément sur toute la surface du milieu en raison de la rotation constante de la coupelle sous la fente d'entrée. Après incubation du semis dans un thermostat, le nombre microbien est calculé selon la formule :
un x 1000 x~y
où a est le nombre de colonies cultivées sur la plaque ; V est le volume d'air passé à travers l'appareil, dm 3; 1000 - volume d'air standard, dm 3.
Lors de la détermination du nombre microbien d'air, la gélose nutritive est utilisée pour isoler les streptocoques hémolytiques - la gélose au sang avec l'ajout de violet de gentiane, suivie d'une microscopie de contrôle et d'une sous-culture sélective des colonies suspectes sur la gélose au sang.
La composition des médias. Gélose au sang au violet de gentiane : 2 % de gélose nutritive, 5 à 10 % de sang de cheval, de lapin ou de bélier défibriné, violet de gentiane (1:50 000).
Gélose jaune-sel (YSA) : 2 % de gélose nutritive, 10 % de chlorure de sodium, 20 % (en volume) suspension de jaune d'œuf (1 jaune d'œuf pour 200 ml de solution isotonique de chlorure de sodium).
D'autres appareils peuvent également être utilisés pour étudier l'air (Dyakov, Rechmensky, Kiktenko, PAB-1 - échantillonnage -
Nick aérosol bactériologique, POV-1 - un dispositif d'échantillonnage de l'air), à l'aide duquel un certain volume d'air passe à travers des liquides ou des filtres, puis des cultures mesurées sont réalisées sur des milieux nutritifs. L'utilisation de PAB-1 et POV-1 permet d'examiner de grands volumes d'air et de détecter des bactéries et virus pathogènes.
Lors de l'examen de l'air des hôpitaux (chirurgie, obstétrique-gynécologique, etc.), les bactéries pathogènes et opportunistes - agents pathogènes des infections nosocomiales (staphylocoques, Pseudomonas aeruginosa, etc.) sont directement isolées. En cas d'infections nosocomiales d'étiologie staphylococcique, des études sont menées visant à identifier les sources et les voies de propagation des infections : par lysotypage, l'identité des staphylocoques isolés d'objets environnementaux, ainsi que de patients et de soignants, est déterminée. Indicateurs standard du nombre et du contenu microbiens Staphylococcus aureus,
Allumage en feu. Il s'agit d'une méthode de stérilisation fiable, mais dont l'utilisation est limitée en raison de la détérioration des articles. Les anses bactériologiques sont ainsi stérilisées.
Stérilisation à sec Chauffer. Elle est réalisée au four Pasteur (sec------
armoire sèche) à une température de 160-170°C pendant 1 heure. Cette méthode stérilise la verrerie de laboratoire, les pipettes enveloppées dans du papier, les éprouvettes fermées par des bouchons de coton. À des températures supérieures à 170 ° C, la carbonisation du papier, du coton et de la gaze commence.
Stérilisation à la vapeur sous pression (autoclavage). La méthode de stérilisation la plus polyvalente. Elle est réalisée dans un autoclave - un stérilisateur eau-vapeur. Le principe de fonctionnement de l'autoclave est basé sur la dépendance du point d'ébullition de l'eau à la pression.
L'autoclave est une chaudière métallique à double paroi avec un couvercle hermétique. De l'eau est versée au fond de l'autoclave, les objets stérilisés sont placés dans la chambre de travail, le couvercle est fermé, d'abord sans le visser hermétiquement. Allumez le feu et portez l'eau à ébullition. La vapeur résultante déplace l'air de la chambre de travail, qui sort par le robinet de sortie ouvert. Lorsque tout l'air a été expulsé et qu'un flux continu de vapeur sort du robinet, le robinet est fermé, le couvercle est hermétiquement fermé. La vapeur est amenée à la pression désirée sous le contrôle d'un manomètre. La température de la vapeur dépend de la pression : à la pression atmosphérique normale, l'aiguille du manomètre est à 0 atm. - température de la vapeur 100°С, à 0,5 atm. - 112°С, à 1 atm. -121°С, à 1,5 atm. - 127°С, à 2 atm. - 134°C. À la fin de la stérilisation, éteignez l'autoclave, attendez que la pression diminue, relâchez progressivement la vapeur et ouvrez le couvercle. Généralement à une pression de 1 atm. dans les 20 à 40 minutes, stérilisez les milieux nutritifs simples et les solutions ne contenant pas de protéines ni de glucides, les pansements, le linge. Les matériaux à stériliser doivent être perméables à la vapeur. Lors de la stérilisation de matériaux en grands volumes (matériel chirurgical), le temps est porté à 2 heures. A une pression de 2 atm. produire la désinfection du matériel pathologique et des cultures de déchets de microbes.
Les milieux nutritifs contenant des sucres ne peuvent pas être stérilisés à 1 atm, car ils caramélisent, ils sont donc soumis à une stérilisation fractionnée avec un courant de vapeur ou autoclavés à 0,5 atm.
Des méthodes biologiques et physiques sont utilisées pour contrôler le régime de stérilisation. La méthode biologique est basée sur le fait que les spores de Bacillus stearothermophilus sont placées simultanément avec le matériel stérilisé, qui meurt à 121°C en 15 minutes. Après stérilisation, les spores ne doivent pas se développer sur un milieu nutritif. La méthode physique est basée sur l'utilisation de substances ayant un certain point de fusion, par exemple le soufre (119°C), l'acide benzoïque (120°C). Des tubes scellés contenant la substance mélangée à un colorant sec (magenta) sont placés dans un autoclave avec le matériel à stériliser. Si la température dans l'autoclave est suffisante, la substance fondra et changera la couleur du colorant.
Liquide de stérilisation la vapeur_s'effectue dans un appareil de Koch ou dans un autoclave avec le couvercle dévissé et le robinet de sortie ouvert. L'eau de l'appareil est chauffée à 100°C. La vapeur qui en résulte traverse le matériau posé et le stérilise. Un seul traitement à 100°C ne tue pas les spores. Par conséquent, une méthode de stérilisation fractionnée est utilisée - 3 jours de suite pendant 30 minutes, entre deux sorties pendant une journée à température ambiante. Le chauffage à 100°C provoque une activation thermique des spores, à la suite de quoi elles germent jusqu'au lendemain sous des formes végétatives et meurent lors des deuxième et troisième chauffages. Par conséquent, seuls les milieux nutritifs peuvent être stérilisés à la vapeur, car Les nutriments sont nécessaires à la germination des spores.
Pour les matériaux qui se décomposent à 100 ° C (par exemple, le sérum, les milieux nutritifs contenant des protéines), un autre type de stérilisation fractionnée est utilisé - tyndalisation. Le matériel à stériliser est chauffé au bain-marie à 56-60°C pendant 5-6 jours consécutifs - le premier jour pendant 2 heures, les autres jours pendant 1 heure.
Stérilisation par irradiation
Rayons UV. Les lampes rayonnement ultraviolet utilisé pour désinfecter l'air des établissements médicaux, des boîtes bactériologiques et des laboratoires, ainsi que pour stériliser les liquides à l'aide d'appareils spéciaux.
Stérilisation par rayonnement ionisant divers objets sont exposés dans l'industrie médicale et microbiologique : médicaments, pansements, soie, gants chirurgicaux, seringues jetables, tubes en plastique pour administration intraveineuse et de nombreux autres matériaux.
Application rayonnement ionisant présente plusieurs avantages par rapport à la stérilisation à la chaleur. Lors de la stérilisation avec un rayonnement ionisant, la température de l'objet à stériliser augmente légèrement et, par conséquent, ces méthodes sont appelées stérilisation à froid. Lors de la stérilisation à grande échelle, un convoyeur peut être créé. Les matériaux sont stérilisés sous forme emballée. Il existe deux types d'équipements d'irradiation - les unités gamma au cobalt 60 et les accélérateurs d'électrons.
Stérilisation - (Lat. sterilis - disparition) ou destruction complète des micro-organismes et de leurs spores par exposition à la fois à des facteurs physiques et à des produits chimiques.
Actuellement, la norme industrielle (OST 42-21-2-85) est en vigueur, qui définit les méthodes, moyens et modes de stérilisation et de désinfection des dispositifs médicaux, qui est complétée par l'arrêté n°408 et "Recommandations méthodologiques pour la désinfection, nettoyage pré-stérilisation et stérilisation des dispositifs médicaux " , approuvé par M3 de Russie le 30 décembre 1998 n ° M U-287-113.
Tous les produits en contact avec la surface de la plaie, en contact avec du sang ou des médicaments injectables, et certains types d'instruments médicaux qui entrent en contact avec les muqueuses pendant l'opération et peuvent les endommager sont soumis à une stérilisation.
Méthodes de stérilisation
Il existe des méthodes thermiques - physiques: vapeur, air, glasperleny (dans l'environnement des balles chauffées), ainsi que l'irradiation ultraviolette de l'air intérieur: vestiaires, procédures, salles d'opération. . Dans la pratique clinique, les méthodes de stérilisation thermique sont le plus souvent utilisées, qui consistent en une exposition à la vapeur sous une pression excessive et à une température de stérilisation (autoclavage) et une exposition à de l'air chaud sec atteignant la température de stérilisation (des fours secs de diverses modifications sont utilisés).
Les méthodes chimiques de stérilisation sont réalisées avec des solutions de désinfectants ou des gaz de produits en polyéthylène, des équipements de ventilation pulmonaire artificielle (ALV), divers endoscopes à fibres optiques. La méthode chimique comprend la stérilisation au gaz avec de l'oxyde d'éthylène, de l'oxyde de propylène, du bromure de méthyle et leur mélange, ainsi que la méthode vapeur-formaldéhyde.
Méthode de stérilisation par ultrasons. Stérilisation par rayonnement infrarouge. Méthode de rayonnement dans (installation avec une source de rayonnement pour la stérilisation industrielle d'articles à usage unique). Le choix de la méthode dépend de nombreux facteurs dont les principaux sont :
1. Le matériau dont le produit est fait.
2. Conception du produit.
3. Les conditions de stérilité du produit.
4. Efficacité de la méthode
Autoclave (du grec auto - lui-même et du latin clavis - clé) - signifie "autobloquant". L'autoclavage, ou stérilisation dans un stérilisateur à vapeur, est utilisé pour le processus de stérilisation des instruments, de tout dispositif médical en métal, verre, caoutchouc et textiles, solutions, matériel de suture de ligature.
Modes de stérilisation
1er mode - température 132 °C, pression 2 atm., durée 20 min. Le premier mode (principal) est destiné à la stérilisation des produits en calicot grossier, gaze (matériel de pansement, linge, etc.), verre, y compris les seringues marquées "200 'C", produits en métal résistant à la corrosion.
2ème mode - température 120 °C, pression 1,1 atm., durée 45 min. Le deuxième mode (doux) est recommandé pour les produits en caoutchouc fin, en latex (gants chirurgicaux, etc.) et certains types polymères (polyéthylène haute densité).
3ème mode - température 134°C - 5 min, 2 atm.
Méthode de stérilisation à l'air
Elle est réalisée dans un stérilisateur à air à air chaud sec. Recommandé pour la stérilisation de tout dispositif médical en métal, verre, caoutchouc de silicone.
Modes de stérilisation
1er mode - température 180 °C, durée 60 min. Le premier mode (principal) est destiné à la stérilisation des produits en verre, notamment les seringues marquées "200°C", les produits métalliques : instruments chirurgicaux, dentaires, gynécologiques, y compris les métaux résistant à la corrosion.
2ème mode - température 160 °C, durée 150 min. Le deuxième mode (doux) est destiné à la stérilisation des produits en caoutchouc de silicone, ainsi que des parties de certains appareils et appareils.
Stérilisation avec des solutions chimiques Le peroxyde d'hydrogène a une propriété désinfectante prononcée. Pour la stérilisation, une solution de peroxyde d'hydrogène à 6% est utilisée - exposition 180 minutes, température 50 ° C; à immersion totale pour la stérilisation de produits en polymères, caoutchouc, verre et métaux résistants à la corrosion exposition - 360 min à une température de 18 "C. (période de stérilité - trois jours)
Stérilisation aux gaz La stérilisation est effectuée dans un stérilisateur à gaz stationnaire. OST recommande d'effectuer la stérilisation au gaz d'un certain nombre de dispositifs médicaux avec de l'oxyde d'éthylène ou un mélange OB. Les optiques, les stimulateurs cardiaques, les produits en matériaux polymères, le caoutchouc, le verre, le métal, les pièces en plastique de divers appareils sont soumis à une stérilisation. La mise en œuvre pratique de cette méthode rencontre des difficultés importantes, de sorte que la stérilisation au gaz n'a pas encore reçu la diffusion qu'elle mérite au regard de ses capacités.
La stérilisation est la libération complète des objets environnementaux des formes végétatives et dormantes de micro-organismes grâce à l'utilisation de facteurs physiques ou chimiques.
Antiseptiques - un ensemble de mesures thérapeutiques et préventives visant à la destruction des micro-organismes dans une plaie, une autre formation pathologique ou le corps dans son ensemble.
L'asepsie est un ensemble de mesures thérapeutiques et préventives visant à prévenir l'introduction d'agents infectieux dans la plaie, les tissus, les organes, les cavités corporelles du patient lors de toute manipulation médicale (y compris diagnostique).
La stérilisation est effectuée afin de : 1) empêcher l'introduction de micro-organismes dans le corps humain lors d'interventions médicales ; 2) exclusion de la contamination microbienne des matériels médicinaux et diagnostiques, des milieux nutritifs et des cultures cellulaires utilisés dans les études microbiologiques et immunologiques.
Étapes de stérilisation
La stérilisation des dispositifs médicaux comprend trois étapes : 1) désinfection ; 2) le nettoyage avant la stérilisation et 3) la stérilisation proprement dite. Tous les produits font l'objet d'une désinfection après leur utilisation chez les patients.
La désinfection des produits est effectuée afin de détruire les micro-organismes pathogènes et opportunistes, y compris les agents pathogènes de l'hépatite virale et de l'infection par le VIH, Mycobacterium tuberculosis et les champignons, y compris le genre Candida. Après désinfection, les produits sont lavés à l'eau, séchés et utilisés conformément à leur destination ou soumis à un nettoyage et une stérilisation pré-stérilisation.
Le nettoyage de pré-stérilisation est effectué afin d'éliminer les protéines, les graisses et les contaminants mécaniques, ainsi que les résidus de médicaments.
La stérilisation des produits est effectuée dans le but de détruire les micro-organismes de toutes sortes, y compris les formes de spores. La stérilisation est soumise à tous les produits médicaux qui entrent en contact avec la surface de la plaie, les muqueuses au risque de les endommager, ainsi qu'au contact du sang ou des médicaments injectables.
Désinfection des dispositifs médicaux.
La désinfection des dispositifs médicaux est réalisée par des méthodes physiques et chimiques. Le choix de la méthode dépend des caractéristiques du produit, des matériaux utilisés dans la fabrication des produits et de leur destination.
Méthode de désinfection physique comprend l'ébullition, l'exposition à la vapeur d'eau saturée ou à l'air chaud sec.
L'ébullition des outils est réalisée dans de l'eau distillée pendant 30 minutes à partir du moment de l'ébullition ou dans de l'eau additionnée d'une solution à 2% de bicarbonate de soude (bicarbonate de sodium) pendant 15 minutes à partir du moment de l'ébullition. Ce type de désinfection est utilisé pour les produits en verre, métaux, matériaux polymères résistants à la chaleur et caoutchoucs. Avant l'ébullition, les produits sont nettoyés des contaminants organiques par rinçage à l'eau du robinet ou avec une solution de désinfectants n'ayant pas d'effet fixant dans des récipients spéciaux (sous réserve de mesures de sécurité lors du travail avec du matériel biologique). L'eau de lavage est ensuite désinfectée.
La méthode à la vapeur utilisant de la vapeur d'eau saturée sous surpression désinfecte le verre, le métal, le caoutchouc, le latex, les matériaux polymères résistants à la chaleur. Ils sont placés dans des boîtes de stérilisation (bix) et placés dans un stérilisateur à vapeur (autoclave). L'autoclavage a lieu à 110°C pendant 20 minutes. Le nettoyage préalable des produits des contaminants organiques n'est pas nécessaire.
La méthode à l'air désinfecte les produits en verre, métaux, caoutchouc de silicone dans formulaire ouvert sur les étagères d'un stérilisateur à air (four sec) à une température de 120С pendant 45 minutes. Dans ce cas, un nettoyage préalable obligatoire des produits contre les contaminants organiques est requis.
La méthode physique de désinfection des dispositifs médicaux est simple, respectueuse de l'environnement et sans danger pour le personnel.
Méthode de désinfection chimique implique l'utilisation de solutions de produits chimiques-désinfectants, où les dispositifs médicaux sont immergés immédiatement après leur utilisation chez les patients. Les pré-produits sont nettoyés des contaminants organiques afin d'éviter de réduire l'efficacité des solutions de travail. Les produits détachables sont désinfectés sous forme démontée, les canaux et les cavités des produits doivent être remplis d'une solution désinfectante. Les produits qui ne sont pas en contact direct avec le patient peuvent être décontaminés en essuyant deux fois avec un chiffon imbibé d'une solution désinfectante.
Pour méthode chimique la désinfection utilise des substances qui ont un effet virucide contre les agents pathogènes de l'hépatite virale et de l'infection par le VIH ( Alaminol, Javel, Lysoformin-3000, PVC, Combidesinfectant d'instruments etc.), et dans les organisations antituberculeuses - substances à action mycobactéricide ( Sidex, Septodor, Chloramine B, Javelion ). La désinfection est effectuée selon les schémas recommandés pour ces infections. Les désinfectants qui ne possèdent pas ces propriétés ne doivent pas être utilisés pour décontaminer les dispositifs médicaux.
Les substances contenant du chlore, ainsi que la plupart des produits à base de peroxyde d'hydrogène, sont destinées aux produits en métaux, caoutchoucs, plastiques et verre résistants à la corrosion. L'utilisation d'alcool éthylique est recommandée uniquement pour la désinfection des produits métalliques après leur nettoyage préalable des composés organiques. Les produits contenant des aldéhydes sont recommandés pour les produits en verre, métaux, matériaux polymères, y compris thermolabiles. Le peroxyde d'hydrogène peut être utilisé pour désinfecter les dispositifs médicaux.
Afin de prévenir le développement d'une résistance des micro-organismes aux désinfectants, un changement hebdomadaire des désinfectants chimiques faisant partie d'un groupe de médicaments différent pour la substance active est recommandé.
Une fois la désinfection terminée, les dispositifs médicaux sont lavés à l'eau courante, nettoyage mécanique leurs fraises, brosses, serviettes, après quoi ils sont utilisés conformément à leur destination ou passent à l'étape suivante de stérilisation - nettoyage avant stérilisation.