עיקור בתנאים תעשייתיים. עיקור בטמפרטורה גבוהה
עיקור הוא תהליך של השמדת כל סוגי הפלורה המיקרוביאלית, כולל צורות הנבגים שלהם, ווירוסים באמצעות השפעות פיזיות או כימיות. מכשיר רפואי נחשב סטרילי אם ההסתברות לנטל הביולוגי שלו שווה או פחות מ-10 בחזקת -6. עיקור צריך להיות נתון למכשירים רפואיים הבאים במגע עם הדם של המטופל, במגע עם פני הפצע ובאים במגע עם הקרום הרירי ועלול לגרום להפרה בשלמותו. עיקור הוא תהליך מורכב יישום מוצלחאשר דורש את הדרישות הבאות:
ניקוי יעיל;
חומרי אריזה מתאימים;
עמידה בכללים לאריזת מכשור רפואי;
עמידה בכללים להעמסת הסטריליזטור בחבילות של מכשירים רפואיים;
איכות וכמות נאותות של החומר לסטריליזציה; פעולה תקינה של הציוד;
עמידה בכללים לאחסון, טיפול והובלה של חומר מעוקר.
תהליך העיקור של מכשירים ומוצרים רפואיים מסיום הפעולה ועד לאחסון סטרילי או לשימוש הבא כולל ביצוע פעילויות ברצף מסוים. יש לעקוב בקפדנות אחר כל השלבים כדי להבטיח את הסטריליות והחיים הארוכים של המכשירים. באופן סכמטי, זה יכול להיות מיוצג באופן הבא:
הניחו את המכשירים בצד לאחר השימוש חיטוי -> ניקוי מכני של המכשיר -> בדיקת נזקים -> שטיפת המכשירים ייבוש -> אריזה באריזת עיקור -> עיקור -> אחסון/שימוש סטרילי. בעת שימוש באריזת עיקור (נייר, נייר כסף או מיכלי עיקור), ניתן לאחסן את המכשירים סטריליים ולאחר מכן להשתמש בהם בין 24 שעות ל-6 חודשים.
במוסדות רפואיים משתמשים במספר צורות של ארגון עיקור: מבוזר, ריכוזי, מבוצע ב-CSO ומעורב. בפרקטיקה של רופא שיניים חוץ, נעשה שימוש לעתים קרובות יותר בסטריליזציה מבוזרת (במיוחד במרפאות פרטיות). עיקור מרכזי אופייני למרפאות שיניים מחוזיות ולמרפאות פרטיות גדולות. לעיקור מבוזר יש מספר חסרונות משמעותיים המשפיעים על יעילותו. עיבוד טרום עיקור של מוצרים מתבצע לרוב באופן ידני, ואיכות מוצרי הניקוי נמוכה. קשה לשלוט בעמידה בטכנולוגיית העיקור, כללי האריזה, העמסת מוצרים לסטריליזטורים ויעילות פעולת הציוד בתנאים של עיקור מבוזר. כל זה מוביל לירידה באיכות העיקור. כאשר משתמשים בצורת עיקור ריכוזית, ניתן להגיע לתוצאות עיקור גבוהות יותר על ידי שיפור הקיימים והכנסת השיטות העדכניות ביותרעיקור (מיכון של מכשירי כביסה ומוצרים רפואיים, הקלת עבודת צוות פרא-רפואי וכו'). במחלקת העיקור הריכוזית קיימות: כביסה, חיטוי, אריזה ומחלקה לסטריליזציה ואחסון נפרד של חפצים סטריליים. טמפרטורת האוויר בכל החטיבות צריכה להיות בין 18°C ל-22°C, לחות יחסית- 35-70%, כיוון זרימת האוויר - מאזורים נקיים לאזורים מזוהמים יחסית.
שיטות עיקור
העיקור מתבצע בשיטות פיזיקליות: קיטור, אוויר, גלספרלניק (בסביבת חרוזי זכוכית מחוממים), קרינה, באמצעות קרינה אינפרא אדומה ושיטות כימיות: פתרונות כימיקליםוגזים (טבלה 3). בְּ השנים האחרונותנעשה שימוש באוזון (מעקר S0-01-SPB) ועיקור פלזמה (מתקן סטראד), מתקנים המבוססים על תחמוצת אתילן, אדי פורמלדהיד. בחירת שיטת העיקור של מוצרים תלויה בעמידותם לשיטות של חשיפה לעיקור.
יתרונות וחסרונות שיטות שונותעיקור מוצגים בטבלה.
שולחן.
כל המוצרים לפני עיקור עוברים ניקוי לפני עיקור.
כאשר מעוקרים בשיטות פיזיות (קיטור, אוויר), מוצרים, ככלל, מעוקרים ארוזים בחומרי אריזה המותרים בהתאם לנוהל שנקבע לייצור ושימוש תעשייתי ברוסיה. בשיטת הקיטור ניתן להשתמש בקופסאות עיקור ללא פילטרים ועם פילטר. בשיטת האוויר, כמו גם בשיטות קיטור וגז, מותר עיקור של מכשירים בצורה לא ארוזה.
שיטת עיקור בקיטור
שיטת הקיטור מעקרת מוצרים רפואיים, חלקי מכשירים ומכשור העשויים ממתכות עמידות בפני קורוזיה, זכוכית, תחתונים כירורגיים, חבישות ותפרים, מוצרי גומי (צנתרים, בדיקות, צינורות), לטקס ופלסטיק. בשיטת הקיטור, חומר העיקור הוא אדי מים רוויים בלחץ עודף של 0.05 MPa (0.5 kgf / cm2) - 0.21 MPa (2.1 kgf / cm2) (1.1-2.0 bar) עם טמפרטורה של 110- 134°C. תהליך העיקור מתבצע בסטריליזטורים (אוטוקלאבים). המחזור המלא הוא בין 5 ל-180 דקות (טבלה). על פי GOST 17726-81, השם של סוג זה של מכשירים הוא "סטריליזטור קיטור". למרות העובדה שטיפול בקיטור יעיל למדי, זה לא תמיד יכול להבטיח את העיקור של המכשיר. הסיבה לכך היא שכיסי אוויר בחפצים מעוקרים יכולים לשמש כמבודד תרמי, כמו מכשירי יד של טורבינות שיניים. כדי לפתור בעיה זו, אוטוקלבים משתמשים בפונקציה של יצירת ואקום מראש מצב דופק. יתרונות השיטה הם מחזור קצר, אפשרות לעקר מוצרים שאינם עמידים בחום, שימוש באריזות מסוגים שונים. החיסרון הוא העלות הגבוהה של הציוד.
שולחן.
שיטת עיקור אוויר
עיקור בשיטת האוויר מתבצע עם אוויר חם יבש בטמפרטורה של 160 מעלות, 180 מעלות ו-200 מעלות צלזיוס (טבלה).
שולחן.
שיטת האוויר מעקרת מכשירים רפואיים, חלקי מכשירים ומכשור העשויים ממתכות עמידות בפני קורוזיה, משקפיים המסומנים ב-200 מעלות צלזיוס, מוצרי גומי סיליקון. לפני עיקור אוויר, המוצרים עוברים ניקוי לפני עיקור ויש לייבש אותם בתנור בטמפרטורה של 85 מעלות צלזיוס עד להיעלמות הלחות הנראית לעין. מחזור מלא הוא עד 150 דקות. היתרון של עיקור אוויר חם לעומת שיטת הקיטור הוא העלות הנמוכה של הציוד. החסרונות הם: מחזור סטריליזציה מלא ארוך (לפחות 30 דקות), סיכון לפגיעה במכשירים על ידי טמפרטורות גבוהות, חוסר אפשרות לעקור בדים ופלסטיק, פרמטר בקרה אחד בלבד - טמפרטורה, עלויות אנרגיה גבוהות.
עיקור גלספרלן
עיקור גלספרלן מתבצע בסטריליזטורים, חומר העיקור שבו הוא המדיום של חרוזי זכוכית מחוממים בטמפרטורת עבודה של 190-330 מעלות צלזיוס. במהלך העיקור, מכשירים יבשים מונחים במדיום של חרוזי זכוכית חמים לעומק של יותר מ-15 מ"מ. בשיטה זו ניתן לעקר רק מכשירים שגודלם אינו עולה על 52 מ"מ, יש לטבול אותם לחלוטין בתא למשך 20-180 שניות, תלוי בגודל. לאחר סטריליזציה, המוצרים משמשים מיד לייעודם. טמפרטורת הפעולה הגבוהה וחוסר היכולת לטבול לחלוטין את המכשירים בסביבת העיקור מגבילים את העיקור של מגוון רחב של מכשירים רפואיים.
עיקור בשיטת גז
עבור שיטת עיקור הגז, נעשה שימוש בתערובת של תחמוצת אתילן ומתיל ברומיד ביחס משקל של 1: 2.5, בהתאמה (OB), תחמוצת אתילן, תמיסת אדים של פורמלדהיד באלכוהול אתילי ואוזון. עיקור עם תערובת של ABOUT ואתילן אוקסיד מתבצע בטמפרטורה של לפחות 18 מעלות צלזיוס, 35 מעלות צלזיוס ו-55 מעלות צלזיוס, אדים של תמיסה של פורמלדהיד באתנול בטמפרטורה של 80 מעלות צלזיוס. לפני עיקור גז, המוצרים לאחר ניקוי טרום עיקור מיובשים עד להיעלמות הלחות הנראית לעין. הוצאת הלחות מחללי המוצרים מתבצעת באמצעות ואקום מרכזי, ובהיעדרו באמצעות משאבת סילון מים המחוברת לברז מים. במהלך עיקור עם OB ואתילן אוקסיד, האוויר מוסר ללחץ של 0.9 kgf/cm2. בעת שימוש במכשיר נייד, לאחר השלמת העיקור, הוא נשמר בפנים קולט אדיםלמשך 5 שעות.
אוזון המיוצר במעקר האוזון S0-01-SPB מעקר מוצרים בעלי תצורה פשוטה העשויים מפלדות וסגסוגות עמידות בפני קורוזיה, שנפרקו בטמפרטורה של לא יותר מ-40 מעלות צלזיוס. מחזור העיקור (גישה למצב, עיקור, טיהור) הוא 90 דקות. לאחר סטריליזציה, המכשירים משמשים לייעודם באופן מיידי ללא אוורור נוסף. תקופת שימור הסטריליות של מוצרים היא 6 שעות, בכפוף לכללי האספסיס. כאשר ארוזים בבד כותנה דו-שכבתי סטרילי, תקופת הסטריליות היא 3 ימים, וכאשר נשמרים בתא עם מקרינים קוטלי חיידקים- 7 ימים.
ברוסיה רשומה היחידה היחידה - מעקר הגז של חברת "Münchener Medical Mechanic GmbH" באמצעות אדי פורמלדהיד, מומלץ לעיקור ציוד בעייתי.
חשיפה לאינפרא אדום
שיטות עיקור חדשות באות לידי ביטוי בסטריליזטור עיקור אינפרא אדום המיועד לעיבוד עיקור של מכשירים רפואיים מתכתיים ברפואת שיניים, מיקרוכירורגיה, רפואת עיניים ושאר תחומי הרפואה.
היעילות הגבוהה של אפקט העיקור IR מבטיחה הרס מוחלט של כל המיקרואורגניזמים שנחקרו, כולל כגון: S. epidermidis, S. aureus, S. sarina flava, Citrobacter diversus, Str. דלקת ריאות, Bacillus cereus.
גישה מהירה, תוך 30 שניות, למצב 200±3 מעלות צלזיוס, מחזור קצר של טיפול עיקור - מ-1 עד 10 דקות, תלוי במצב הנבחר, יחד עם צריכת אנרגיה נמוכה, אין דומה ליעילותם של כל אחת מהשיטות המשמשות עד כה עיקור. סטריליזטור עיקור IR קל לתפעול, אינו דורש מפעילים מיומנים במיוחד, והשיטה עצמה שייכת לטכנולוגיה ידידותית לסביבה. שלא כמו עיקור קיטור, אוויר או גלספרלן, עיקור IR אינו תוקף את כלי החיתוך באמצעות חומר עיקור (קרינת אינפרא אדומה).
קרינה מייננת
החומרים הפעילים הם קרני גמא. במתקני בריאות, קרינה מייננת אינה משמשת לחיטוי. הוא משמש לעיקור מוצרים חד פעמיים בייצור במפעל.
שיטה זו משמשת לסטריליזציה של מכשירים שחומריהם אינם יציבים תרמית ולא ניתן להשתמש בשיטות מומלצות רשמית אחרות. החיסרון בשיטה זו הוא שלא ניתן לעקר את המוצרים באריזה ולאחר סטריליזציה יש לשטוף אותם בנוזל סטרילי (מים או תמיסת נתרן כלורי 0.9%), שאם מופרים כללי האספסיס עלול להוביל לזיהום משני של המוצרים המעוקרים עם מיקרואורגניזמים. לכימיקלים משתמשים במיכלים סטריליים העשויים מזכוכית, פלסטיק עמיד בחום העומד בפני עיקור בקיטור ומתכות מצופה אמייל. הטמפרטורה של התמיסות, למעט משטרים מיוחדים לשימוש במי חמצן וליסופורמין 3000, צריכה להיות לפחות 20 מעלות צלזיוס עבור חומרים המכילים אלדהיד ולפחות 18 מעלות צלזיוס עבור חומרים אחרים (טבלה).
שולחן.
השיטה הכימית של עיקור נמצאת בשימוש נרחב לעיבוד "ציוד בעייתי", למשל, לציוד עם סיבים אופטיים, ציוד הרדמה, קוצבי לב ומכשירי שיניים. חומרי עיקור מודרניים כגון גלוטאראלדהיד, נגזרות של חומצות אורתופתליות וסוקסיניות, תרכובות המכילות חמצן ונגזרות של חומצה פראצטית משמשים במצבי עיקור מפורש ו"עיקור קלאסי". התרופות המופקות מהן נחשבות למבטיחות - Erigid Forte, Lysoformin-3000, Sidex, NU Sidex, Sidex OPA, Gigasept, Steranios, Secusept Active, Secusept Pulver ”, “Anioxide 1000”, “Clindesin forte”, “Clindesine oxy”, ובסיכום ההצדקה הכלכלית לשימוש בתרופות אלו, יש להסיק שהן אינן שוות, מה שנקבע לפי עיתוי השימוש בפתרונות עבודה (למשל, מכל התרופות, רק ל"אריג'יד פורטה" יש אפשרות של שימוש בתמיסת העבודה למשך 30 יום לעיקור "קלאסי").
מוצרים ניתנים להסרה עוברים סטריליזציה ללא הרכבה. על מנת למנוע הפרה של ריכוז תמיסות העיקור, המוצרים הטבולים בהם חייבים להיות יבשים. מחזור העיבוד הוא 240-300 דקות, וזה חיסרון משמעותי של השיטה. בנוסף, החיסרון הוא העלות הגבוהה של חומרי החיטוי. היתרון הוא שאין ציוד מיוחד. מוצרים סטריליים שטופים לאחר הוצאת הנוזל מהתעלות והחללים משמשים מיד למטרה המיועדת להם או לאחר אריזה בקליקו כותנה סטרילית דו-שכבתית, הניח בקופסה סטרילית מרופדת בסדין סטרילי לתקופה של לא יותר מ-3 ימים. .
כל העבודה על עיקור המוצרים מתבצעת בתנאים אספטיים בחדרים מיוחדים שהוכנו כיחידת הפעלה (קוורץ, ניקיון האביב). הצוות משתמש בסרבלים סטריליים, כפפות, משקפי מגן. שטיפת המוצרים מתבצעת ב-2-3 החלפות מים סטריליות, 5 דקות כל אחת.
בקרת יעילות עיקור
יעילות העיקור נשלטת על ידי שיטות פיזיקליות, כימיות ובקטריולוגיות.
שיטות בקרה פיזיות כוללות: מדידת טמפרטורה, לחץ וזמן יישום העיקור.
במשך עשרות שנים נעשה שימוש בכימיקלים לבקרה כימית בעלי נקודת התכה קרובה לטמפרטורת העיקור. חומרים אלו היו: חומצה בנזואית - לעיקור בקיטור; סוכרוז, הידרוקינון ועוד כמה - כדי לשלוט בסטריליזציה באוויר. אם הייתה התכה ושינוי צבע של חומרים אלה, אז התוצאה של עיקור נחשבה משביעת רצון. מכיוון שהשימוש באינדיקטורים לעיל אינו אמין מספיק, אינדיקטורים כימיים הוכנסו כעת לפרקטיקה של שליטה בשיטות עיקור תרמי, שצבען משתנה בהשפעת טמפרטורה המתאימה למצב מסוים למשך זמן מסוים הנדרש ליישום מצב זה. על ידי שינוי צבע האינדיקטורים נשפטים הפרמטרים העיקריים של עיקור - הטמפרטורה ומשך העיקור. מאז 2002, GOST RISO 11140-1 "עיקור של מוצרים רפואיים. אינדיקטורים כימיים. דרישות כלליות", שבהן אינדיקטורים כימיים מחולקים לשש מחלקות:
ל כיתה א'אינדיקטורים של חיצוני ו תהליך פנימי, אשר מונחים על המשטח החיצוני של האריזה עם מכשירים רפואיים או בתוך סטים של מכשירים ומצעים כירורגיים. שינוי בצבע המחוון מעיד על כך שהאריזה עברה תהליך עיקור.
שיתוף. כיתה בכוללים אינדיקטורים שאינם שולטים בפרמטרים של עיקור, אך מיועדים לשימוש בבדיקות מיוחדות, למשל, בהתבסס על אינדיקטורים כאלה, הם מעריכים את יעילות משאבת הוואקום ואת נוכחות האוויר בתא של מעקר הקיטור.
ל כיתה ג'כוללים אינדיקטורים הקובעים פרמטר עיקור אחד, למשל, הטמפרטורה המינימלית. עם זאת, הם אינם מספקים מידע על זמן החשיפה לטמפרטורה.
ל כיתה ד'כוללים מחוונים מרובי פרמטרים המשנים את צבעם כאשר הם נחשפים למספר פרמטרים של עיקור. דוגמה לאינדיקטורים כאלה הם אינדיקטורים לעיקור קיטור ואוויר של שימוש חד פעמי IKPVS-"Medtest".
ל כיתה ה'כוללים שילוב אינדיקטורים המגיבים לכל הפרמטרים הקריטיים של שיטת העיקור.
ל כיתה ו'כוללים אינדיקטורים-אימולטורים. המחוונים מכוילים לפי הפרמטרים של מצבי העיקור שבהם הם משמשים. אינדיקטורים אלה מגיבים לכל הפרמטרים הקריטיים של שיטת העיקור. אינדיקטורים הדמיים הם המודרניים ביותר. הם רושמים בבירור את איכות העיקור עם היחס הנכון של כל הפרמטרים - טמפרטורה, קיטור רווי, זמן. אם אחד מהפרמטרים הקריטיים אינו נצפה, המחוון אינו פועל. בין אינדיקטורים תרמו-זמן ביתיים, אינדיקטורים "IS-120", "IS-132", "IS-160", "IS-180" של חברת "Vinar" או מחווני קיטור ("IKPS-120/45", " IKPS-132 / 20") ועיקור אוויר ("IKPVS-180/60" ו-"IKVS-160/150") של IKVS לשימוש חד פעמי של חברת Medtest.
כללים בסיסיים לשימוש במחווני קיטור ואוויר לשימוש חד פעמי IKPVS-"Medtest"
כל הפעולות עם אינדיקטורים - מיצוי, הערכת תוצאות - מבוצעות על ידי צוות המבצע עיקור.
הערכה וחשבונאות של תוצאות הבקרה מתבצעת על ידי הערכת שינויי הצבע של המצב ההתחלתי של תווית המחוון התרמי של כל מחוון, בהשוואה לתווית הצבע של תקן ההשוואה.
אם הצבע של המצב הסופי של תווית המחוון התרמי של כל האינדיקטורים מתאים לתווית הצבע של תקן ההשוואה, זה מצביע על כך שהערכים הנדרשים של פרמטרי מצב העיקור בתא העיקור מתקיימים.
מותרים הבדלים בעוצמת עומק הצבע של תווית המחוון התרמי של האינדיקטורים, בשל חוסר האחידות של ערכי הטמפרטורה המותרים באזורים שונים של תא העיקור. אם תווית המחוון התרמי של מחוון אחד לפחות שומרת באופן מלא או חלקי על צבע שניתן להבדיל בקלות מהצבע של מצב הייחוס, הדבר מצביע על כך שהערכים הנדרשים של פרמטרי מצב העיקור בתא העיקור אינם נצפו.
מחוונים ותקני השוואה חייבים להתאים במספרי אצווה. אסור להעריך את התוצאות של בקרת עיקור באמצעות אינדיקטורים של מנות שונות.
הערכת ההתאמה של השינוי בצבע של תווית המחוון התרמי בהשוואה לתקן מתבצעת בתאורה של לפחות 215 לוקס, התואמת למנורת ליבון מט של 40 W, ממרחק של לא יותר. יותר מ-25 ס"מ. לצורך בקרה בקטריולוגית, משתמשים כיום בבדיקות ביו שיש בהן כמות מנה של נבגים של תרבית הבדיקה. השיטה הקיימת מאפשרת להעריך את יעילות העיקור לא לפני 48 שעות, מה שלא מאפשר שימוש במוצרים שכבר מעוקרים עד לקבלת תוצאות הבקרה בקטריולוגית.
אינדיקטור ביולוגי הוא הכנה של מיקרואורגניזמים פתוגניים היוצרים נבגים הידועים כבעלי עמידות גבוהה לסוג זה של תהליך עיקור. מטרת האינדיקטורים הביולוגיים היא לאשר את יכולתו של תהליך העיקור להרוג נבגים חיידקיים עמידים. זוהי הבדיקה הקריטית והאמינה ביותר של תהליך העיקור. אינדיקטורים ביולוגיים משמשים כבקרת עומס: אם התוצאה חיובית (גידול מיקרוביאלית), אזי לא ניתן להשתמש בעומס זה ויש להחזיר את כל העומסים הקודמים עד לתוצאה השלילית האחרונה. כדי לקבל תגובה ביולוגית אמינה, יש להשתמש רק באינדיקטורים הביולוגיים התואמים את התקנים הבינלאומיים EC 866 ו-ISO 11138/11135. בשימוש במדדים ביולוגיים מתעוררים קשיים מסוימים - צורך במעבדה מיקרוביולוגית, כוח אדם מיומן, משך הדגירה עולה פעמים רבות על משך העיקור, צורך בהסגר (אי-אפשרות שימוש) במוצרים מעוקרים עד לקבלת תוצאות. בשל הקשיים שלעיל ביישום השיטה הביולוגית ברפואת שיניים בחוץ, נהוג להשתמש בשיטות פיזיקליות וכימיות לשליטה ביעילות העיקור.
הערכת יעילות פעולתם של חומרי חיטוי וחיטוי. קביעת רגישות של חיידקים לתרופות אנטי-מיקרוביאליות
מבוא.הרס של חיידקים פתוגניים לבני אדם היא אחת הבעיות החשובות ביותר במניעה ובטיפול של מחלות שונות. כדי להילחם בחיידקים, נעשה שימוש בשיטות של אספסיס, חיטוי, חיטוי וטיפול אנטי-מיקרוביאלי. לכל שיטה יש מטרות ותנאי יישום ספציפיים משלה.
נושא 7.1. שיטות להערכת ההשפעה האנטי-מיקרוביאלית של גורמים כימיים ופיזיים
מבוא.אספסיס -מערכת של אמצעים המונעים החדרה (חדירה) של מיקרואורגניזמים מהסביבה לרקמות או חללים של גוף האדם במהלך מניפולציות רפואיות ואבחנתיות, כמו גם לחומר למחקר, ב. תקשורת תרבותותרביות של מיקרואורגניזמים במחקרי מעבדה. אספסיס מספקת עמידה בכללים ושיטות עבודה סניטריים והיגייניים מיוחדים, כמו גם עיבוד מיוחד של כלים, חומרים, ידיים של עובדים רפואיים, חצרים וכו'. לצורך הרס חלקי (חיטוי) או מלא (עיקור) של חיידקים.
חומרי חיטוי- קומפלקס של אמצעים טיפוליים ומניעתיים שמטרתם הרס של מיקרואורגניזמים העלולים לגרום לתהליך זיהומי באזורים פגועים של העור והריריות על ידי טיפול בהם בחומרים מיקרובידיים - חומרי חיטוי.
סְטֶרִילִיזַציָה- הרס מוחלט של מיקרואורגניזמים, כולל צורות וגטטיביות ונבגים. ישנן 3 קבוצות עיקריות של שיטות עיקור: פיזיקליות, מכניות וכימיות. בחירת השיטה המשמשת לפתרון בעיה מעשית תלויה בחפץ המיועד לעקר.
חיטוי- חיטוי חפצים סביבתיים. בניגוד לעיקור, חיטוי מביא למותם של רוב צורות החיידקים, אך לא של כולם, ובכך מספק רק הפחתה בזיהום המיקרוביאלי (זיהום), ולא טיהור מוחלט של החפץ. לכן, חפצים שעברו חיטוי אינם בטוחים לחלוטין.
▲ לְתַכְנֵן
▲ תכנית
1. אספטי, חיטוי וחיטוי. חומרי חיטוי וחיטוי.
2. פעולה אנטי-מיקרוביאלית של גורמים פיזיקליים וכימיים.
3. שיטות עיקור; מכשיר המשמש לעיקור.
4. שיטות לניטור יעילות העיקור, פעולת חיטוי וחומרי חיטוי.
הפגנה
1. מכשיר המשמש לעיקור: מכשיר חיטוי, תנור, סינון והקרנת UV.
ו המשימהתלמידים
1. קח בחשבון את תוצאות הניסויים שבוצעו עם חפצי בדיקה חיידקיים כדי לשלוט ביעילות העיקור המתבצע על ידי הרתחה וחיטוי. לעשות מסקנה.
2. קבעו את ההשפעה האנטיבקטריאלית של קרני ה-UV על סטפילוקוקוס ו-Escherichia coli באמצעות גידולים מוכנים.
3. קח בחשבון את תוצאות הניסויים שהוקמו לקביעת ההשפעה האנטי-מיקרוביאלית של חומרים מחטאים ומחטאים. לעשות מסקנה.
הנחיות
שיטות עיקור
I. שיטות פיזיקליות.חשיפה לטמפרטורות גבוהות. לטמפרטורה גבוהה יש השפעה מיקרובידית בשל היכולת לגרום לדנטורציה של הביופולימרים החשובים ביותר, בעיקר חלבונים.
עיקור בחום יבש בארון ייבוש ועיקור (תנורי פסטר)מבוסס על השפעת החיידקים של אוויר מחומם ל-165-170 מעלות צלזיוס למשך 45 דקות. בטמפרטורה גבוהה יותר מתרחשת חריכה של פקקי כותנה, נייר בו עטופים הכלים ובטמפרטורה נמוכה יותר נדרשת תקופת עיקור ארוכה. חום יבש מעקר כלי זכוכית (צלחות פטרי, מבחנות, פיפטות וכו').
חיטוי- עיקור עם קיטור מחומם (בלחץ מוגבר) במעקר קיטור (אוטוקלאב). אחד ה שיטות יעילותעיקור, שנמצא בשימוש נרחב לא רק במיקרוביולוגי, אלא גם בפרקטיקה הקלינית. עבודה עם אוטוקלאב דורשת ביצוע מדויק הוראות מיוחדותועמידה בתקנות הבטיחות. טמפרטורת הקיטור המקסימלית נמדדת באמצעות מדחום מיוחד, אשר מונח בחיטוי יחד עם החומר המיועד לעיקור. במקרים מסוימים משתמשים בכימיקלים בעלי נקודת התכה מסוימת: בנזונפתול (PO °C), חומצה בנזואית (120 °C). אמצעים תזונתיים רבים, חבישות, פשתן מעוקרות בלחץ של 1 atm למשך 15-20 דקות, מדיות תזונתיות עם פחמימות ב-0.5 atm למשך 15 דקות, וחיטוי של חומר נגוע מתבצע ב-1.5-2 atm למשך 20-25 דקות (טבלה 7.1.1).
טבלה 7.1.1. הקשר בין לחץ, טמפרטורה ומשך העיקור במעקר קיטור (אוטוקלאב)
0 100 30-60 (חלקים) 0.5 111 20-30
1 121 15-20 1,5 127 15-20
עיקור בקיטורמתבצע בחיטוי עם מכסה לא מוברג ובריין יציאה פתוח. שיטת עיקור זו מבוססת על ההשפעה האנטיבקטריאלית של קיטור על תאים וגטטיביים. הוא משמש במקרים בהם החומר המיועד לעיקור אינו יכול לעמוד בטמפרטורות גבוהות, כגון חומרי הזנה עם ויטמינים, פחמימות. עבור טיהור מלא, העיקרון של עיקור חלקי משמש, כלומר. החומר עובר סטריליזציה ב-100 "C (או 80-90 מעלות צלזיוס) למשך 20-30 דקות במשך 3 ימים ברציפות. במקרה זה, התאים הווגטטיביים מתים, והנבגים נשארים ונובטים תוך יום אחד. חימום כפול לאחר מכן מבטיח סטריליות אמינה מספיק של החומר.
טינדליזציה -זהו עיקור חלקי של חומרים ב-56-58 "C למשך שעה 5-6 ימים ברציפות. הוא משמש לעיקור של חומרים שנהרסים בקלות בטמפרטורות גבוהות (סרום דם, ויטמינים וכו').
הצתה בלהבהתנור רוח או מבער גז
השינוי מוגבל, למשל, לעיקור של לולאות בקטריולוגיות, מחטים לנתח, פינצטה.
חשיפה לקרינה מייננת. ההשפעה המיקרוביסטית של קרינה מייננת מבוססת על יכולתן לגרום נזק במולקולת ה-DNA. לסטריליזציה של מכשירים רפואיים חד פעמיים וציוד בקטריולוגי הרגיש להשפעות תרמיות (כלי פלסטיק לטיפוח חיידקים ותרביות תאים, מזרקי פלסטיק, מערכות עירוי דם וכו'), לרוב משתמשים בסטריליזציה באמצעות קרינת γ.
I. שיטות מכניות.הם מבוססים על סינון באמצעות מסנני ממברנה מיוחדים בעלי גודל נקבוביות קטן, המסוגלים לשמור באופן מכני על מיקרואורגניזמים. מסנני נייר ופולימר נמצאים בשימוש נרחב במעבדה. ישנם מסננים עם נקבוביות בגדלים שונים, מכוילים בקפדנות, המאפשרים להבטיח את טיהור החומר לא רק מחיידקים, אלא גם מווירוסים, ובמידת הצורך מכמה מקרומולקולות. סינון משמש לעיקור חומרים נוזלייםשאינם עומדים בחום (נסיוב דם, תמיסות אנטי-מיקרוביאליות, רכיבי מדיה תזונתית לחיידקים ותרביות תאים), להשגת רעלני חיידקים ומוצרי פסולת אחרים של חיידקים. סינון הוא השיטה המובילה לעיקור אוויר בעת הצורך. לשם כך, האוויר מועבר דרך מסננים ספוגים בקוטלי חיידקים. מערכות עיקור כאלה משמשות, למשל, בקופסאות שולחניות לעבודה עם פתוגנים של זיהומים מסוכנים במיוחד, וכן בחדרי ניתוח, מחלקות יולדות וכו'.
III. שיטות כימיות.הם מבוססים על טיפול באובייקט בכימיקלים בעלי השפעה מיקרובידית ומסוגלים, בכפוף לאופני חשיפה מסוימים, להבטיח הרס מוחלט של המיקרופלורה. עיקור כימי משמש בדרך כלל לעיבוד מכשירים שונים ומכשירים לשימוש חוזר הרגישים לטמפרטורות גבוהות (מכשירים סיבים אופטיים, שתלים רפואיים וכו'). סוכני עיקור כוללים אתילן אוקסיד, מי חמצן, גלוטראלדהיד, חומצה פרוקסיאצטית, כלור דו חמצני.
ללא קשר לשיטה, נדרש מעקב קבוע אחר יעילות הליך העיקור בכל המקרים. לשם כך משתמשים באינדיקטורים ביולוגיים - מיקרואורגניזמים ידועים העמידים ביותר לשיטת עיבוד זו (לדוגמה, נבגים Bacillus stearothermophilusלשלוט ביעילות של חיטוי, Bacillus subtilis- לשלוט בסטריליזציה בחום יבש). ישנם גם אינדיקטורים פיזיקו-כימיים - חומרים שעוברים גלוי
השינויים שלי (שינוי צבע, מצב צבירה וכו') רק אם יש להבחין במצב העיבוד הנכון.
שיטות חיטוי
שיטות פיזיקליות וכימיות משמשות לחיטוי.
I. שיטות פיזיקליות.חשיפה לטמפרטורות גבוהות
סיור.
רְתִיחָה.מזרקים, מכשירי ניתוח קטנים, שקופיות זכוכית וכיסויי כיסוי ועוד כמה פריטים מונחים בסטריליזטורים שאליהם יוצקים מים. כדי לבטל קשיות ולהעלות את נקודת הרתיחה, מוסיפים למים תמיסת נתרן ביקרבונט 1-2%. הרתחה מתבצעת במשך 30 דקות לפחות. בעת רתיחה, חלק מהנגיפים (לדוגמה, וירוס הפטיטיס B) ונבגי חיידקים נשארים ברי קיימא.
פִּסטוּרמבוסס על ההשפעה האנטיבקטריאלית של הטמפרטורה על תאים וגטטיביים, אך לא על נבגי חיידקים. החומר מחומם בטמפרטורה של 50-65 "C במשך 5-10 דקות, ולאחר מכן קירור מהיר. בדרך כלל משקאות ומוצרי מזון (יין, בירה, מיצים, חלב וכו') מפוסטרים.
חשיפה לקרינה מייננת. קרינה אולטרא - סגולה(UV) עם אורך גל של 260-300 מיקרון יש אפקט מיקרובידי בולט למדי, עם זאת, סוגים מסוימים של חיידקים ונבגים עמידים בפני UV. לכן, קרינת UV אינה מסוגלת להבטיח הרס מוחלט של המיקרופלורה - עיקור האובייקט. טיפול UV משמש בדרך כלל לחיטוי חלקי (חיטוי) של חפצים גדולים: משטחי חפצים, חדרים, אוויר במוסדות רפואיים, מעבדות מיקרוביולוגיות וכו'.
קרינת גמאיש השפעה מיקרובידית בולטת על רוב המיקרואורגניזמים, כולל צורות וגטטיביות של חיידקים ונבגים של רוב המינים, פטריות, וירוסים. משמש לעיקור כלים מפלסטיק וכלים רפואיים חד פעמיים. יש לזכור שטיפול בקרינת גמא אינו מבטיח הרס של גורמים זיהומיים כגון פריונים.
II. שיטות כימיות.זהו עיבוד של חפץ מחוטא
tami - כימיקלים מיקרובידיים. כמה
לחלק מהתרכובות הללו עשויות להיות השפעות רעילות
על גוף האדם, אז הם משמשים אך ורק
לעיבוד חפצים חיצוניים. בתור חומר חיטוי
בדרך כלל משתמשים במי חמצן, המכיל כלור
אחדות (תמיסת אקונומיקה 0.1-10%, תמיסה של 0.5-5%.
כלורמין, 0,1-10
% תמיסה של שני שליש מלח בסיסי של היפו-
סידן כלורט - DTSGK), פורמלדהיד, פנולים (3-5% תמיסה של פנול, ליזול או חומצה קרבולית), יודופורים. בחירת חומר החיטוי וריכוזו תלויים בחומר לחיטוי. חיטוי עשוי להספיק כדי לטהר רק את אותם מכשירים רפואיים שאינם חודרים את המחסומים הטבעיים של הגוף (לרינגוסקופים, ציסטוסקופים, מאווררים). כמה חומרים ( חומצה בורית, merthiolate, glycerin) משמשים כחומרי שימור להכנת סמים טיפוליים ואבחונים, חיסונים ותרופות אחרות.
שיטות חיטוי
כחומרי חיטוי, משתמשים רק בתרכובות בעלות רעילות נמוכה לגוף בעלות השפעה אנטי-מיקרוביאלית. נפוץ ביותר 70% אתנול, תמיסת יוד 5%, תמיסת 0.1% KMp0 4, תמיסת אלכוהול 0.5-1% של מתילן כחול או ירוק מבריק, תמיסת כלורהקסידין 0.75-4.0%, תמיסת הקסכלורופן 1-3% ועוד כמה חיבורים. חומרים אנטי-מיקרוביאליים מתווספים גם לחומרים המשמשים לייצור חבישות, פלסטרים דבקים, תותבות, חומרי מילוי וכדומה. על מנת להקנות להם תכונות קוטל חיידקים.
שיטות לניטור יעילות העיקור, פעולת חיטוי וחומרי חיטוי. מחקר של הפעולה האנטיבקטריאלית של טמפרטורות גבוהות. הניחו חוטי משי המורטבים בתערובת של תרביות יוצרות נבגים (3 מבחנות) ולא יוצרות נבגים (3 מבחנות) לתוך מבחנות עם מרק מזין. חיטוי או להרתיח צינור אחד עם כל תרבית; אין לחשוף את צינורות הבקרה לפגיעה כלשהי. לאחר העיבוד, שמור את כל הגידולים בתרמוסטט ב-37 מעלות צלזיוס למשך 24 שעות. סמן את תוצאת הניסוי והסיק מסקנה.
בקרת סטריליות של חבישות ומכשירים כירורגיים. דגימות הבדיקה (או ספוגיות מפני השטח של מכשירים גדולים) נזרעות על שלושה אמצעים: מרק סוכר, מדיום תיוגליקול ומצע נוזלי של Sabouraud. גידולים מודגרים בתרמוסטט למשך 14 ימים. בהיעדר גידול בכל הגידולים, החומר נחשב לסטרילי.
מחקר על הפעולה האנטיבקטריאלית של קרני UV. השעיה של סטפילוקוקוס או אי - קוליבתמיסת נתרן כלוריד איזוטונית בנפח 1 מ"ל, מניחים במרחק של 10-20 ס"מ ממרכז המנורה. לחסן את תרחפי החיידקים המוקרנים והלא מוקרנים (בקרה) לתוך מרק מזין ודגירה
ב-37 מעלות צלזיוס למשך 16-24 שעות, ולאחר מכן העריכו את התוצאות: היעדר עכירות של המדיום קשור למוות של תרבית החיידקים המוקרנת, עכירות מצוינת בבקרה, מה שמעיד על נוכחות של צמיחה.
קביעת הפעולה האנטי-מיקרוביאלית של חומרי חיטוי וחיטוי. 1. הכינו שני סוגים של חפצי בדיקה: א) חוטי משי ספוגים בתרבית אי - קולי;ב) חוטי משי המורטבים בתרבית יוצרת נבגים (עם תכולה גבוהה של נבגים). את החוטים שמים בתמיסות של פנול (5%), ליסול (5%), אקונומיקה (10%) למשך 5 ו-60 דקות, לאחר מכן נשטפים מחומרי הבדיקה, זורעים במרק מזין ומכניסים לתרמוסטט עד למחרת. . בקרות פעולה חומרים כימייםלא נושא. שימו לב לתוצאה של הניסוי והסיקו מסקנה.
2. להרטיב דיסקיות נייר סינון בתמיסות של חומרי בדיקה ולהניח על פני השטח של אגר תזונתי בצלחת פטרי עם זרע (עם דשא) עם תרבית בדיקה של סטפילוקוקוס או Escherichia coli. דגירה על המנה במשך 24 שעות ב-37 מעלות צלזיוס. הפעולה האנטיבקטריאלית של החומרים הנחקרים נשפטת לפי קוטר האזורים של עיכוב גדילת חיידקים הנוצרים סביב הדיסקים.
נושא 7.2. שיטות להערכת יעילות פעולתן של תרופות אנטי-מיקרוביאליות
מבוא. תרופות אנטי-מיקרוביאליות (אנטיביוטיקה טבעית וסינתטית) משמשות לטיפול במחלות הנגרמות על ידי מיקרואורגניזמים. לקבלת טיפול יעיל, יש צורך לבחור תרופה בעלת הפעילות הגדולה ביותר ביחס לגורם זיהומי זה ויש לה הכי פחות נזקמיקרופלורה אנושית רגילה. התפוצה הרחבה של זני חיידקים בעלי דרגות שונות של עמידות לתרופות רבות (רב-עמידות) הופכת את ההערכה האיכותית (בשיטת הדיסק) והכמותית (בשיטת דילול סדרתית) של רגישות חיידקים לתרופות טיפוליות לרלוונטית במיוחד.
▲ תוכנית
1. ספקטרום פעולה של הקבוצות העיקריות של תרופות אנטי-מיקרוביאליות.
2. הערכת השפעת תרופות אנטי-מיקרוביאליות על חיידקים בשיטת הדיסק.
3. קביעת הריכוז המינימלי המעכב (MIC) של תרופות אנטי-מיקרוביאליות בשיטת דילול סדרתי.
ו.הפגנה
1. אנטי מיקרוביאלים מקבוצות שונות.
2. דיסקיות נייר סטנדרטיות ספוגות בחומרים אנטי-מיקרוביאליים כדי לקבוע את רגישות החיידקים אליהם.
3. טבלאות ותכניות של ספקטרום אנטיבקטריאלי של הקבוצות החשובות ביותר של אנטיביוטיקה ומנגנוני פעולתן האנטיבקטריאלית.
מטלה לתלמידים
1. הגדר ניסוי לקביעת רגישות סטפילוקוק לאנטיביוטיקה שונים בשיטת הדיסק.
2. על סמך תוצאות הניסוי קבעו את הריכוז המעכב המינימלי של פניצילין לתרביות חיידקים שונות בשיטת דילול סדרתי.
הנחיות
קביעה כמותית של רגישות חיידקים לתרופות אנטי-מיקרוביאליות בשיטת דילולים סדרתיים.שיטה זו משמשת לקביעת הריכוז המעכב המינימלי (MPC) - הריכוז הנמוך ביותר של אנטיביוטיקה המדכא לחלוטין את גדילת החיידקים הנחקרים. מכינים תמיסה אנטיביוטית המכילה את התרופה בריכוז מסוים (μg/ml או U/ml) בתמיסת פיזיולוגית או חיץ או בממס מיוחד. תמיסת המניות משמשת להכנת דילולים סדרתיים (פי 2) של האנטיביוטיקה במדיום תזונתי - מרק (בנפח של 1 מ"ל) או אגר. מתרבית החיידקים הנחקרת, מכינים תרחיף בצפיפות סטנדרטית ומחסנים ב-0.1 מ"ל על מדיה עם ריכוזים שונים של האנטיביוטיקה, וכן על מצע ללא התרופה (בקרת תרבות). התרביות מודגרות בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס למשך 20-24 שעות או יותר (לחיידקים שגדלים לאט), ולאחר מכן מציינים את תוצאות הניסוי לערפול של מרק התזונה או להופעת גידול גלוי של חיידקים על האגר, בהשוואה עם השליטה. נלקח כ-IPC.
הריכוז הגבוה ביותר של התרופה המונע התפתחות של CPP או הצטברות של אנטיגנים פתוגנים בתאים נלקח כ-MIC.
פרשנות של תוצאות, כלומר. הערכת רגישות קלינית, מתבצעת על בסיס הקריטריונים המפורטים בטבלה. 7.2.1. זנים רגישים כוללים זני חיידקים שצמיחתם מעוכבת בריכוזי התרופה המצויים בסרום הדם של המטופל בעת שימוש במינונים טיפוליים ממוצעים של אנטיביוטיקה. זנים עמידים במידה בינונית כוללים זנים שדיכוי הגדילה שלהם מצריך ריכוזים שנוצרים בסרום הדם בעת מתן המינונים הטיפוליים המקסימליים של התרופה. מיקרואורגניזמים עמידים, שצמיחתם אינה מדוכאת על ידי התרופה בריכוזים שנוצרים בגוף בעת שימוש במינונים המרביים המותרים.
טבלה 7.2.1. פרשנותהתוצאות של קביעת רגישות החיידקים לאנטיביוטיקה בשיטת דילול סדרתי
| אַנטִיבִּיוֹטִי | MIC (mcg/ml) | ||
| להרגיש- | ביניים | יַצִיב- | |
| גוּף | מְדוּיָק | עירית | |
| (S) | (ד | (R) | |
| פניצילינים | |||
| בנזילפניצילין: | |||
| עבור סטפילוקוקוס | £0.12 | - | >0,25 |
| עבור חיידקים אחרים | <1,5 | >1,5 | |
| אוקסצילין | |||
| ל Staphylococcus aureus | <2 | - | >4 |
| לסוגים אחרים של סטפילוקוקוס | <0,25 | - | >0,5 |
| מתיצילין | <2 | - | >4 |
| אמפיצילין: | |||
| עבור סטפילוקוקוס | <0,25 | - | >0,5 |
| ל אי - קוליואנטרובקטריות אחרות | <8 | >32 | |
| קרבניצילין: | |||
| ל אי - קוליואנטרובקטריות אחרות | <16 | >64 | |
| ל Pseudomonas aeruginosa | <128 | >512 | |
| פיפרצילין | |||
| ל אי - קוליואנטרובקטריות אחרות | <16 | >64 | |
| ל Pseudomonas aeruginosa | >64 | - | >182 |
| אזלוצילין | <64 | - | >128 |
| צפלוספורינים | |||
| צפזולין | <8 | >32 | |
| צפלוטין | <8 | >32 | |
| צ'פקור | <8 | >32 | |
| צפלקסין | <8 | >32 | |
| צפורוקסים | <8 | >32 |
הֶמְשֵׁך
ביניים (ד
| צפמנדול | <8 | >32 | ||
| Cefotaxime | <8 | 16-32 | >64 | |
| Ceftriaxone | <8 | 16-32 | >64 | |
| Cefoperazone | <16 | >64 | ||
| צפטאזידיים | <8 | >32 | ||
| cefepime | בטא חדשה | <8 -лактамы | >32 | |
| אימיפנם | <4 | >16 | ||
| מירופנם | <4 | >16 | ||
| קווינולונים | ||||
| חומצה נלידיקסית | SI6 | - | >32 | |
| ציפרלקס | <1 | >4 | ||
| אופלוקסצין | <2 | >8 | ||
| נורפלוקסצין | <4 юзиды | >16 | ||
| אמינוגלי | ||||
| קנאמיצין | <16 | >64 | ||
| גנטמיצין | <4 | >16 | ||
| טוברמיצין | <4 | >16 | ||
| Amikacin | <16 | >64 | ||
| Netilmicin | <8 | >32 | ||
| טטרציקלינים, מקרולידים, לינקוסאמידים | ||||
| טטרציקלין | <2 | 4-8 | >16 | |
| דוקסיציקלין | <4 | >16 | ||
| אריתרומיצין | 50,5 | 1-4 | >8 | |
| אזיתרומיצין | <2 | >8 | ||
| קלריתרמיצין | <2 | >8 | ||
| אלנדומיצין | <2 | >8 | ||
| לינקומיצין | <2 | >8 | ||
| קלינדמיצין | <0,25 | 0,5 | >1 | |
| אנטיביוטיקה של קבוצות אחרות | ||||
| כלורמפניקול (אריה | אומיציטין) | <8 | >32 | |
| חומצה פוסידית | <2 | 4-8 | >16 | |
| ריפמפיצין | <2 | >8 | ||
| פולימיקסין | <50 ЕД/мл | >50 U/ml | ||
| ונקומיצין | <4 | 8-16 | S32 | |
| פוראדונין | <32 | >128 |
מערכות מיקרו-בדיקה לקביעת רגישות לתרופות אנטי-מיקרוביאליות.מערכות מיקרו-טסט נועדו לקבוע במהירות את הרגישות הקלינית לאנטיביוטיקה של חיידקים ממינים מסוימים או קבוצות קשורות. תרופות שנבדקו בריכוזים סטנדרטיים נמצאות בבארות של צלחות פלסטיק מוכנות. הרגישות של התרבית הנחקרת לשני ריכוזים של כל אנטיביוטיקה נקבעת: הטיפול הממוצע והמקסימלי. החומר ממושבה מבודדת מוכנס ל-5 מ"ל של מדיום תזונתי סטנדרטי המכיל אינדיקטור באמצעות לולאה בקטריולוגית מדידה (נפח 1 μl), ומכינים תרחיף. תרחיף החיידקים המוכן מוזגים לתוך בארות הטבליה ב-0.1 מ"ל ומודגרים בתנאי הטמפרטורה והרכב הגז של המדיום האופטימליים עבור סוג זה של חיידקים. צמיחת החיידקים נשפטת על פי השינוי בצבע של המחוון, מה שיכול להפחית משמעותית את זמן המחקר. אם החיידקים נשארים ברי קיימא בנוכחות אנטיביוטיקה, שחרור של מוצרים מטבוליים מוביל לשינוי בצבע האינדיקטור. היעדר שינוי צבע מעיד על דיכוי מוחלט של הפעילות החיונית של החיידק. התוצאות נקבעות לאחר 4 שעות של דגירה באמצעות ספקטרופוטומטר.
קביעת הרגישות הקלינית של חיידקים לתרופות אנטי-מיקרוביאליות בשיטת הדיסק (בדיקת דיפוזיה). השיטה מבוססת על דיכוי צמיחת חיידקים על מצע תזונתי צפוף בפעולת אנטיביוטיקה הכלולה בדיסק נייר. כתוצאה מהדיפוזיה של התרופה לתוך האגר, נוצר שיפוע ריכוז של האנטיביוטיקה סביב הדיסק. גודלו של אזור עיכוב הגדילה תלוי ברגישות החיידק ובתכונות התרופה (בפרט, קצב הדיפוזיה באגר). כדי לקבוע את הרגישות בפרקטיקה הקלינית, נעשה שימוש בדיסקים סטנדרטיים מוכנים עם תוכן מוגדר בהחלט של אנטיביוטיקה. תכולת התרופה נקבעת על סמך הריכוזים הטיפוליים של כל אנטיביוטיקה והערכים הממוצעים של ה-MIC עבור חיידקים פתוגניים. שם התרופה וכמותה מצוינים בכל דיסק. כדי לקבוע רגישות, מכינים תרחיף המכיל מספר סטנדרטי של תאים ברי קיימא מתרבית החיידקים שנחקרה וזורעים עם מדשאה בכלי פטרי (קוטר 100 מ"מ) על מדיית Muller-Hinton או AGV (מדיה מיוחדת שאינה מונעת דיפוזיה של חומרים אנטי-מיקרוביאליים ואין להם השפעה שלילית עליהם). דיסקים מוחלים על משטח הזרע בעזרת מוליך במרחק של 2.5 ס"מ ממרכז הכלי במעגל (איור 7.2.1). לא יותר מ-5 דיסקים מונחים על הכוס. גידולים מודגרים במשך 18-20 שעות בטמפרטורה של 35 C. אם ההליך מבוצע כהלכה, על רקע מדשאת חיידקים אחידה מסביב לדיסקות,
אזורי עיכוב צמיחה, בעלי צורה עגולה. ההתחשבנות בתוצאות מתבצעת על ידי מדידת קוטר אזור עיכוב הגדילה. עבור האזור שיימדד, קח את האזור שבו הצמיחה של חיידקים נעדר לחלוטין. הפרשנות של התוצאות שהתקבלו (המסקנה לגבי הרגישות) מתבצעת על בסיס הקריטריונים המפורטים בטבלה. 7.2.2.
טבלה 7.2.2. פרשנות התוצאות של קביעת רגישות החיידקים לאנטיביוטיקה בשיטת הדיסק (על מדיום AGV)
פניצילינים
| בנזילפניצילין: | ||||
| בעת בדיקת סטפילוקוקוס | 20 פאונד | 21- | -28 | >29 |
| בעת בדיקת חיידקים אחרים | 10 פאונד | 11- | -16 | 17 פאונד |
| אמפיצילין: | ||||
| בעת בדיקת סטפילוקוקוס | <20 | 21- | -28 | 29 פאונד |
| כאשר נבדק גרם שלילי | ||||
| חיידקים חדשים ואנטרוקוקים | <9 | 10- | -13 | >14 |
| קרבניצילין (25 מק"ג) | 14 פאונד | 15- | -18 | >19 |
| קרבניצילין (100 מק"ג) בשעה | ||||
| מִבְחָן P. aeruginosa | 11 פאונד | 12- | -14 | 15 פאונד |
| מתיצילין | 13 פאונד | 14- | -18 | >19 |
| אוקסצילין (10 מק"ג) | $15 | 16- | -19 | 20 פאונד |
| אזלוצילין (עבור P.aeruginosa) | 13 פאונד | 14- | -16 | 16 פאונד |
| פיפרצילין (עבור P.aeruginosa) | <17 | >18 | ||
| אזטריונם | <15 | 16- | -21 | 22 פאונד |
צפלוספורינים
הֶמְשֵׁך
| אַנטִיבִּיוֹטִי | קוֹטֶר | אזורי גמגום | |
| (מ"מ) | |||
| להרגיש- | ביניים | יַצִיב- | |
| גוּף | מְדוּיָק | עירית | |
| (S) | (ד | (R) | |
| בטא לקטמים חדשים | |||
| אימיפנם*<13 | 14-15 | >16 | |
| Meropenem*<13 | 14-15 | >16 | |
| קווינולונים | |||
| ציפרלקס<15 | 16-20 | >21 | |
| אופלוקסצין<12 | 13-16 | >17 | |
| חומצה נלידיקסית*<12 | 13-17 | >18 | |
| אמינוגליקוזידים | |||
| סטרפטומיצין<16 | 17-19 | >20 | |
| קנאמיצין<14 | 15-18 | >19 | |
| גנטמיצין 15 פאונד | - | >16 | |
| סיזומיצין<15 | - | >16 | |
| טוברמיצין<14 | - | >15 | |
| Amikacin<14 | 15-16 | >17 | |
| Netilmicin<12 | 13-14 | >15 | |
| טטרציקלינים, מקרולידים, לינקוסאמידים | |||
| טטרציקלין<16 | 17-20 | >22 | |
| דוקסיציקלין<15 | 16-19 | >20 | |
| אריתרומיצין<17 | 18-21 | >22 | |
| אזיתרומיצין<13 | 14-17 | >18 | |
| Roxithromycin*<14 | 15-18 | >19 | |
| קלריתרמיצין* 13 פאונד | 14-17 | >18 | |
| לינקומיצין<19 | 20-23 | 24 פאונד | |
| קלינדמיצין 14 פאונד | 15-20 | >21 | |
| אולינדומיצין 16 פאונד | 17-20 | >21 | |
| אנטיביוטיקה של קבוצות אחרות | |||
| כלורמפניקול<15 | 16-18 | >19 | |
| חומצה פוסידית<16 | 17-20 | >21 | |
| ריפמפיצין<12 | 13-15 | >16 | |
| פולימיקסין<11 | 12-14 | >15 | |
| Vancomycin: | |||
| עבור סטפילוקוקוס<11 | - | >12 | |
| עבור אנטרוקוקי<14 | 15-16 | >17 | |
| ריסטומיצין<9 | 10-11 | >12 | |
| פוראדונין 15 פאונד | 16-18 | >19 | |
| Furagin 15 פאונד | 16-18 | >19 |
*נתונים ראשוניים.
לשימוש בשיטת הדיסק יש מספר מגבלות. השיטה מתאימה רק לקביעת רגישותם של חיידקים הגדלים במהירות היוצרים מדשאה הומוגנית תוך 24 שעות על מצע תזונתי צפוף סטנדרטי בהרכב די פשוט (מולר-הינטון או AGW) שאינו מכיל חומרים שיכולים להפחית את הפעילות של אנטיביוטיקה או למנוע את התפשטותם. אחרת, המידע שיתקבל לא יהיה מדויק.
לפיכך, לא ניתן להשתמש בשיטת הדיסק כדי לקבוע את הרגישות לאנטיביוטיקה של כל החיידקים הגדלים לאט והקפדניים ביותר, הכוללים פתוגנים אנושיים רבים. (Mycobacterium spp., Helicobacter spp., Bacteroides spp., Prevotella spp., Brucella spp., Mycoplasma spp.ורבים אחרים). בעת קביעת הרגישות של כמה חיידקים קפדניים שעבורם פותחו בדיקות סטנדרטיות (Haemophilus spp., Neisseria spp.,יש להשתמש בסוגים מסוימים של סטרפטוקוקים), אמצעי תרבות מיוחדים וקריטריונים נוספים בעת פירוש התוצאות.
שיטת הדיסק גם אינה נותנת תוצאות מהימנות בקביעת רגישות החיידקים לתכשירים המתפזרים בצורה גרועה לאגר, למשל אנטיביוטיקה פוליפפטידית (פולימיקסין, ריסטומיצין).
קביעה כמותית של רגישות חיידקים לאנטי-מיקרוביאלים באמצעות מבחן E.בדיקת ה-E היא גרסה של שיטת הדיפוזיה המאפשרת לקבוע את ה-MIC של אנטיביוטיקה. במקום דיסקים, משתמשים ברצועות פולימר סטנדרטיות, שהוכנו בטכנולוגיה מיוחדת (AB BIODISK) ומכילות חומרים אנטי-מיקרוביאליים מקובעים המיושמים בצורה של שיפוע ריכוז מתמשך. בצד השני של הרצועה
טבלה 7.2.3. קביעת ה-MIC של חומרים אנטי-מיקרוביאליים בשיטת דילול סדרתי
למבחן ה-E יש סולם של ערכי IPC. כאשר הרצועה מונחת על פני האגר, תהליך דיפוזיה מבוקר מבטיח שנוצר שיפוע ריכוז יציב של התרופה התואם לקנה המידה בתווך התזונתי סביב הרצועה. הליך קביעת הרגישות באמצעות מבחן E מתבצע בדומה לבדיקה בשיטת הדיסק. לאחר הדגירה של הזרע, נוצר אזור עיכוב צמיחה אליפטי סביב הרצועה. ערך ה-IPC מתאים להצטלבות של האזור האליפטי עם רצועת הבדיקה E. קריטריונים סטנדרטיים משמשים לפירוש התוצאות (הערכת רגישות קלינית) (טבלה 7.2.3).
אקולוגיה של מיקרואורגניזמים
מבוא.האקולוגיה של מיקרואורגניזמים היא ענף של מיקרוביולוגיה כללית וחוקר את הקשר של מיקרו- ומקרו-אורגניזמים החיים יחד בביוטופים מסוימים. בבתי גידול טבעיים (אדמה, מים, אוויר, אורגניזמים חיים), חיידקים הם חלק מביוצנוזות שונות. האקולוגיה של חיידקים הגורמים למחלות אנושיות נקבעת על פי יכולתם לשרוד בסביבה החיצונית, לשנות מארחים ולהתמיד באורגניזם המארח על רקע הפעולה. מערכת החיסון, והוא קשור גם לשיטות הפצתם, העברתם ומספר גורמים נוספים. הערכה של מספר תנאים סביבתיים היא אחת המשימות העיקריות של המיקרוביולוגיה הסניטרית.
מחקר סניטרי ובקטריולוגי עומד בבסיס עבודה מעשיתרופאים סניטריים ואפידמיולוגים בהערכה סניטרית והיגיינית של חפצים סביבתיים, מוצרי מזון, משקאות וכו'. ולמלא תפקיד מוביל במניעת מחלות זיהומיות. מושא מחקר חשוב במיקרוביולוגיה רפואית הוא המיקרופלורה הרגילה של גוף האדם, הכוללת חיידקים החיים על העור, ריריות של איברים שונים (חלל הפה, הלוע, האף, דרכי הנשימה העליונות, המעיים, במיוחד המעי הגס, וכו.). חלק מהם כן קבוע (חובה)תושבי גוף האדם, אחרים - זמני (אופציונלי או חולף).מיקרופלורה תקינה היא מערכת גוף חיונית המספקת הגנה מפני חיידקים פתוגניים רבים, הבשלה וגירוי של מערכת החיסון, ייצור של מספר ויטמינים ואנזימים המעורבים בעיכול וכו'.
ההרכב האיכותי והכמותי של המיקרופלורה האנושית משתנה לאורך החיים ותלוי במין, גיל, תזונה וכו'. בנוסף, תנודות בהרכב המיקרופלורה האנושית יכולות לנבוע מהתרחשות מחלות ושימוש בתרופות, בעיקר אנטיביוטיקה ואימונומודולטורים . הערכה של ההרכב האיכותי והכמותי של המיקרופלורה של גוף האדם על פי אינדיקטורים מסוימים מאפשרת לזהות את ההפרה שלה (dysbacteriosis) ואת ההשלכות הקשורות אליה.
נושא 8.1. מיקרופלורה של מים, אוויר ואדמה. שיטות למחקר סניטרי-בקטריולוגי של מים, אוויר ואדמה
תוכנית g
1. מיקרופלורה של מים, אוויר ואדמה.
2. מיקרואורגניזמים אינדיקטיביים סניטריים ומשמעותם.
3. שיטות לקביעת if-index, if-titer ומספר מיקרוביאלי של מים.
4. שיטות לקביעת מספר החיידקים של האוויר.
5. שיטות לקביעת titer perfringens, titer coli, וספירת חיידקים בקרקע.
והפגנה
1. בדיקה סניטרית ובקטריולוגית של מים בשיטת מסנני ממברנה.
2. בדיקה סניטרית ובקטריולוגית של אוויר. המנגנון של קרוטוב. גידול של מיקרואורגניזמים על MPA בצלחת פטרי. גידול של סטרפטוקוקים המוליטיים על אגר דם.
3. מחקר סניטרי ובקטריולוגי של הקרקע. צְמִיחָה פרוטאוס וולגריס(לפי שוקביץ').
אמטלה לתלמידים
1. להעריך את המצב התברואתי והבקטריולוגי של המים בהתבסס על תוצאות קביעת מספר החיידקים, אינדקס הקולי והקולי-טיטר.
2. להעריך את המצב התברואתי והבקטריולוגי של האוויר בהתבסס על תוצאות קביעת מספר החיידקים.
3. להעריך את המצב התברואתי והבקטריולוגי של הקרקע בהתבסס על תוצאות קביעת מספר החיידקים, coli-titer, perfringens-titer וטיטר של חיידקים תרמופילים.
4. לחסן שטיפה מעור הידיים על תווך גלוקוז-פפטון.
▲ הנחיות
שיטות מיקרוביולוגיות לחקר הסביבה
כדי להעריך את המצב התברואתי וההיגייני של חפצי סביבה שונים, מים, מזון וכו', מתבצעים מחקרים סניטריים ובקטריולוגיים, שמטרתם לקבוע את סכנת המגיפה. עם זאת, גילוי ישיר של חיידקים פתוגניים קשור למספר קשיים, בעיקר בשל הריכוז הנמוך של חיידקים אלה, אשר, ככלל, אינם יכולים להתרבות באוויר, במים ובאדמה. לכן, בפרקטיקה סניטרית ומיקרוביולוגית, נעשה שימוש בשיטות עקיפות, המבוססות על קביעת הזיהום המיקרוביאלי הכולל של אובייקט זה או אחר ועל זיהוי של מה שנקרא חיידקים סניטריים-אינדיקטיביים(טבלה 8.1.1).
טבלה 8.1.1. חיידקים סניטריים-אינדיקטיביים של הסביבה והמזון
| חפץ | אופי הזיהום | חיידקי אינדיקציה סניטריים |
| מים | צואה | חיידקים מקבוצת Escherichia coli Escherichia coli, Citrobacter freundii, Enterobacter aerogenes, Enterococcus faecalis |
| הקרקע | גַם | אותם חיידקים וקלוסטרידיה (Clostridium perfringens, CI. sporogenesוכו.) |
| תעשייתי-יומיומי- | חיידקים תרמופיליים, פרוטאוס | |
| vye (זבל מתכלה) | וולגריס | |
| מזון | צואה | |
| מוצרים | מנעולים S. faecalis, P. vulgaris | |
| טפטוף דרך הפה | Staphylococcus aureus | |
| פריטים | צואה | חיידקים מקבוצת חולי המעיים |
| חיי היום - יום | מנעולים, P. vulgaris, E. faecalis | |
| טפטוף דרך הפה | S. aureus | |
| אוויר | גַם | S. aureus, S. pyogenes |
| מים, | תַעֲשִׂיָתִי | זני ייצור של מיקרו- |
| הקרקע, | גלימות | |
| אוויר |
חיידקים סניטריים-אינדיקטיביים, מעידים זיהום צואההסביבה, הם החיידקים של קבוצת Escherichia coli (CGB). הם שייכים לסוגים שונים של המשפחה Enterobacteriaceae.סימני אבחון דיפרנציאליים של BGKP מוצגים בטבלה. 8.1.2. זיהוי של E. coli בכל מוצרי סביבה או מזון נחשב למדד האמין ביותר לזיהום צואה טרי. נוכחות של חיידקים ציטרובקטרו אנטרובקטרמעיד על זיהום צואה ישן יחסית. נוכחותם של Clostridium perfringens, C. sporogens וקלוסטרידיות אחרות באדמה מעידה על זיהום הצואה שלה, טרי וישן כאחד, שכן חיידקים אלו יוצרים נבגים, המאפשרים להם להתמיד בסביבה (בפרט, באדמה) למשך תקופה. הרבה זמן. איתור בחפצים סביבתיים Enterococcus faecalisמעיד גם על זיהום הצואה שלהם. קבוצת החיידקים התרמופילים כוללת חיידקים לא קשורים, נציגים של משפחות שונות שיכולות להתרבות בטמפרטורה של 60 מעלות צלזיוס ומעלה. (Lactobacillus lactis, Streptococcus thermophilusוכו.). הם אינם תושבי קבע של המעי האנושי ואינם משמשים קריטריונים לזיהום צואה של הסביבה. עלייה חדה במספר החיידקים הללו עשויה להעיד על זיהום קרקע בפסולת מתפרקת, שכן הם מתרבים בזבל וקומפוסט המחממים את עצמם.
טבלה 8.1.2. סימני אבחון דיפרנציאליים של BGKP
Escherichia Blend + - +
coliחומצות
ציטרובקטראותו דבר + - p + +
freundii
אנטרובקטרבוטאן - - + - + +
אירוגניםדיול
סמלים: (+) - תגובה חיובית, (-) - תגובה שלילית, p - תגובות שונות.
חיידקים השייכים לסוג פרוטאוס (P.vulgaris)וכו') משפחות Enterobacteriaceae,מופץ באופן נרחב בטבע. חיידקי ריקבון אלה במספרים גדוליםנמצא על שרידי ריקבון של בעלי חיים וצמחים. זיהוי החיידקים הללו בכל מזון מעיד ריקבון רקוב.
סטרפטוקוקים המוליטיים (S.pyogenes),בהיותם תושבי מעבר של האף והלוע, הם מופרשים עם טיפות ריר על ידי טיפות מוטסות. תנאי ההישרדות של סטרפטוקוקים המוליטיים בסביבה אינם שונים כמעט מהמונחים האופייניים לרוב הפתוגנים האחרים של זיהומים מוטסים. זיהוי של סטרפטוקוקים המוליטיים באוויר הפנימי מעיד על זיהום אפשרי שלו עם חיידקים הכלולים בלוע, האף, דרכי הנשימה העליונות של אדם ואשר הם הגורמים לזיהומים הנישאים באוויר. Staphylococcus aureusהוא דייר אופציונלי של הלוע האף, הלוע, וגם עוראדם. נוכחותו באוויר פנימי או על חפצים הממוקמים יש אינדיקטור זיהום באוויר.זיהוי סימולטני של Staphylococcus aureus וסטרפטוקוקוס המוליטיים מצביע על רמה גבוהה של זיהום אוויר.
בדיקה סניטרית ובקטריולוגית של מים
קביעת מספר החיידקים של המים. מי ברז מחוסנים בנפח של 1 מ"ל, מים ממאגרים פתוחים - בנפחים של 1.0; 0.1 ו-0.01 מ"ל. כל הדגימות מוכנסות לצלחות פטרי סטריליות, ולאחר מכן יוצקים אותן עם 10-12 מ"ל של מותך ומצננים ל-45-50 מעלות צלזיוס אגר מזין, שהוא בזהירות
מעורבב היטב עם מים. גידולים מודגרים ב-37 מעלות צלזיוס למשך 1-2 ימים. מים ממאגרים פתוחים מחוסנים במקביל על שתי סדרות של כוסות, אחת מהן מודגרת ב-37 מעלות צלזיוס למשך יום אחד, והשנייה למשך יומיים ב-20 מעלות צלזיוס. לאחר מכן סופרים ומחושבים את מספר המושבות שגדלו על פני השטח ובעומק המדיום ספירת חיידקים של מים- מספר המיקרואורגניזמים ב-1 מ"ל.
קביעת אם-טיטר ו-if-index של מים. קולי-טיטרמים - כמות המים המינימלית (מ"ל) שבה מתגלים CGBs. אינדקס קולי- כמות BGKP בליטר מים. אינדיקטורים אלו נקבעים על ידי שיטת הטיטרציה (תסיסה) או שיטת מסנני הממברנה.
שיטת טיטרציה. נפחים שונים של מים מחוסנים לתוך תווך גלוקוז-פפטון (מים פפטון 1%, תמיסת גלוקוז 0.5%, תמיסת נתרן כלורי 0.5%, מחוון אנדרדו ומצף), ולחיסון של כמויות גדולות (100 ו-10 מ"ל), א. נעשה שימוש במדיום מרוכז, המכיל פי 10 מכמות החומרים הללו.
המים של מאגרי שטח פתוחים נבדקים בנפחים של 100; 10; 1.0 ו-0.1 מ"ל. למחקר מי ברזלעשות יבולים של שלושה נפחים של 100 מ"ל, שלושה נפחים של 10 מ"ל ושלושה נפחים של 1 מ"ל. החיסונים מודגרים למשך יום אחד ב-37 מעלות צלזיוס. התסיסה נשפטת לפי נוכחותן של בועות גז בצוף. דגימות מותססות או עכורות מתרבות על מדיום אנדו. מהמושבות הגדלות מבצעים מריחות, צובעים בשיטת גראם ומבצעים בדיקת אוקסידאז להבדיל בין חיידקי הסוג. Escherichia, Citrobacterו אנטרובקטרמחיידקים גראם-שליליים ממשפחת ה-Pseudomonadaceae וחיידקים חיוביים לאוקסידאז אחרים החיים במים. לשם כך מסירים 2-3 מושבות מבודדות מפני השטח של המדיום בעזרת מוט זכוכית, מיושמים במכה על נייר סינון הרטב ב-di-methyl-p-phenylenediamine. עם מבחן אוקסידאז שלילי, צבע הנייר אינו משתנה, עם מבחן חיובי הוא הופך לכחול תוך דקה אחת. מוטות גראם שליליים שאינם יוצרים אוקסידאז נבדקים שוב בבדיקת תסיסה - הם מוכנסים לאגר תזונתי חצי נוזלי עם 0.5 % תמיסת גלוקוז והודגרה ב-37 מעלות צלזיוס למשך יום אחד. בְּ תוצאה חיוביתלקבוע אם הטיטר ואם המדד לפי הטבלה הסטטיסטית. 8.1.3.
שיטת סינון ממברנה. מסנן ממברנה מס' 3 ממוקם במשפך Seitz המותקן בבקבוק בונזן, המחובר למשאבת ואקום. מסנני ממברנה עוברים עיקור מראש על ידי הרתחה במים מזוקקים. מים מרשת אספקת המים ומים מבארות ארטזיות מסוננים בנפח של 333 מ"ל. מים נקייםשל מאגר פתוח מסונן בנפח של 100, 10, 1.0 ו-0.1 מ"ל, מזוהם יותר לפני שהסינון מדולל בסטרילי
טבלה 8.1.3. קביעת אינדקס החיידקים מקבוצת Escherichia coli בחקר המים
קולי-טיטר
מ-3 כרכים של 100 מ"ל
מים. לאחר מכן מניחים את המסננים על פני המדיום של האנדו בצלחות פטרי, ולאחר דגירה ב-37 מעלות צלזיוס למשך יום אחד, סופרים את מספר המושבות הגדלות האופייניות ל-CGB. מכינים מריחות מ-2-3 מושבות אדומות, צובעים לפי שיטת גראם ונקבעת פעילות אוקסידאז. לשם כך, המסנן עם מושבות חיידקים שגדלו עליו מועבר בפינצטה, מבלי להסתובב, למעגל של נייר סינון הרטוב בדימתיל-p-פנילנדיאמין. בנוכחות אוקסידאז, המחוון הופך את המושבה לכחול. 2-3 מושבות שלא שינו את צבען המקורי מחוסנות לתווך חצי נוזלי עם תמיסה של 0.5% גלוקוז. התרבויות מודגרות למשך 24 שעות ב-37 מעלות צלזיוס. בנוכחות היווצרות גזים סופרים את מספר המושבות האדומות על המסנן וקובעים את מדד הקולי. אינדיקטורים נורמטיביים עבור מי שתייהניתנים בטבלה. 8.1.4.
טבלה 8.1.4. תקני מי שתייה (GOST 2874-82)
| תֶקֶן |
אינדקס
מספר החיידקים ב-1 מ"ל מים, לא יותר מ-100
מספר החיידקים מקבוצת Escherichia coli בליטר מים 3
(אם-אינדקס), לא יותר
כדי לקבוע את הטיטר Enterococcus faecalisלהכין פי 10 דילול מים. מים שלמים ודילוליהם בנפח של 1 מ"ל מחוסנים באחד מאמצעי הבחירה הנוזליים (KF, poly-
Myxinovaya וכו'), מודגרת ב-37 "C במשך 2 ימים, לאחר 24 ו-48 שעות, זריעה מתבצעת על מדיה אלקטיבית-דיפרנציאלית צפופה: אגר KF, אגר TTX (בינוני עם טריפנילטטרזוליום כלוריד), אגר פולימיקסינטלוריט. סטרפטוקוקים מזוהים. לפי סוג המושבות, מורפולוגיה של התא וצביעה לפי שיטת גראם.על המדיום עם TTX, סטרפטוקוקים יוצרים מושבות אדומות כהות, על אגר עם טלוריט - שחור.
הרכב התקשורת.מדיום KF: אגר תזונתי 2%, 1% תמצית שמרים, 2% לקטוז, 0.4% נתרן אזיד, 0.06% נתרן קרבונט, מחוון אדום ברומקרסול.
מדיום פולימיקסין: אגר תזונתי 2%, תמצית שמרים 1%, גלוקוז 1%, פולימיקסין M 200 יחידות/מ"ל, מחוון כחול ברומטימול.
אגר פולימיקסינטלוריט: אגר תזונתי 2%, תמצית שמרים 1%, גלוקוז 1%, סגול קריסטל 1:800,000, פולימיקסין M 200 U/ml, 0.01% אשלגן טלוריט.
אגר טריפנילטטרזוליום כלוריד (TTC): אגר תזונתי 2%, תמצית שמרים 1%, גלוקוז 1%, סגול קריסטל 1:800,000, 0.01% TTC.
בעת הגדרת אינדקס E.faecalisהשתמש בטבלאות הסטטיסטיות המשמשות לקביעת אינדקס הקולי. בנוסף, שיטת סינון הממברנה משמשת למטרה זו. כדי לזהות חיידקים פתוגניים, מים מועברים דרך מסנני ממברנה, אשר מונחים לאחר מכן במדיה אלקטיבית נוזלית או על פני השטח של אמצעי אבחון דיפרנציאלי צפוף.
בדיקה סניטרית ובקטריולוגית של אוויר
קביעת מספר החיידקים של האוויר.שיטות מיקרוביולוגיות כמותיות לחקר האוויר מבוססות על עקרונות של שקיעה (שקיעה), שאיבה או סינון.
שיטת שקיעה. שתי צלחות פטרי עם אגר מזין נשארות פתוחות למשך 60 דקות, ולאחר מכן הגידולים מודגרים בתרמוסטט ב-37 מעלות צלזיוס. התוצאות מוערכות לפי המספר הכולל של המושבות שגדלו בשני הכלים: אם יש פחות מ-250 מושבות, האוויר נחשב נקי, 250-500 מושבות מצביעות על זיהום בדרגה בינונית, כאשר מספר המושבות מזוהמות יותר מ-500.
שיטת שאיפה. זוהי שיטה כמותית מדויקת יותר לקביעת ספירת החיידקים של האוויר. זריעת אוויר מתבצעת בעזרת מכשירים. המנגנון של קרוטוב (איור 8.1.1) מתוכנן בצורה כזו שאוויר נשאב במהירות נתונה דרך חריץ צר של צלחת פרספקס הסוגר את צלחת הפטרי עם אגר מזין.
איור.8.1.1. מנגנון קרוטוב למחקר בקטריולוגי
במקביל, חלקיקי אירוסול עם מיקרואורגניזמים הכלולים עליהם קבועים באופן שווה על כל פני השטח של המדיום עקב סיבוב מתמיד של הכוס מתחת לחריץ הכניסה. לאחר דגירה של זריעה בתרמוסטט, מספר החיידקים מחושב לפי הנוסחה:
a x 1000 x~y
כאשר a הוא מספר המושבות שגדלו על הצלחת; V הוא נפח האוויר שעבר דרך המכשיר, dm 3; 1000 - נפח אוויר סטנדרטי, dm 3.
בעת קביעת המספר המיקרוביאלי של האוויר, נעשה שימוש באגר תזונתי לבידוד סטרפטוקוקים המוליטיים - אגר דם בתוספת סיגלית ג'נטיאן, ולאחר מכן מיקרוסקופיה בקרה ותת-תרבות סלקטיבית של מושבות חשודות על אגר דם.
הרכב התקשורת.אגר דם סגול ג'נטיאן: אגר תזונתי 2%, 5-10% דם סוס, ארנב או איל מפורק, סגול ג'נטיאן (1:50,000).
אגר חלמון-מלח (YSA): אגר תזונתי 2%, 10% נתרן כלורי, 20 % (בנפח) תרחיף חלמון (1 חלמון ביצה לכל 200 מ"ל תמיסת נתרן כלורי איזוטונית).
ניתן להשתמש גם במכשירים אחרים כדי לחקור אוויר (Dyakov, Rechmensky, Kiktenko, PAB-1 - דגימה -
Nick aerosol bacteriological, POV-1 - מכשיר לדגימת אוויר), בעזרתו מעבירים נפח מסוים של אוויר דרך נוזלים או מסננים, ולאחר מכן מייצרים יבולים נמדדים על חומרי הזנה. השימוש ב-PAB-1 וב-POV-1 מאפשר לבחון כמויות גדולות של אוויר ולאתר חיידקים ווירוסים פתוגניים.
כאשר בוחנים את האוויר של בתי חולים (כירורגיים, מיילדות-גינקולוגיים וכו'), מבודדים ישירות חיידקים פתוגניים ואופורטוניסטיים - פתוגנים של זיהומים נוסוקומיים (סטפילוקוקוס, Pseudomonas aeruginosa וכו'). במקרה של זיהומים נוזוקומיים של אטיולוגיה סטפילוקוקלית, מבוצעים מחקרים שמטרתם לזהות את המקורות והדרכים להפצת זיהומים: על ידי הקלדת פאג' נקבעת זהותם של סטפילוקוקוסים המבודדים מחפצים סביבתיים, כמו גם מהמטופלים והמלווים. אינדיקטורים סטנדרטיים של מספר ותכולת חיידקים Staphylococcus aureus,
הצתה בוערת.זוהי שיטת עיקור אמינה, אך יש לה שימוש מוגבל עקב הידרדרות של פריטים. לולאות בקטריולוגיות מעוקרות בדרך זו.
עיקור יבשחוֹם. זה מתבצע בתנור פסטר (יבש------
ארון יבש) בטמפרטורה של 160-170 מעלות צלזיוס למשך שעה. שיטה זו מעקרת כלי זכוכית מעבדה, פיפטות עטופות בנייר, מבחנות סגורות עם פקקי כותנה. בטמפרטורות מעל 170 מעלות צלזיוס, מתחילה התפחה של נייר, צמר גפן וגזה.
עיקור בקיטור בלחץ (חיטוי).שיטת העיקור המגוונת ביותר. זה מתבצע בחיטוי - מעקר מים בקיטור. עקרון הפעולה של החיטוי מבוסס על התלות של נקודת הרתיחה של המים בלחץ.
החיטוי הוא דוד מתכת בעל דופן כפולה עם מכסה אטום הרמטית. מים מוזגים לתחתית החיטוי, פריטים מעוקרים מונחים בתא העבודה, המכסה נסגר, תחילה מבלי להבריג אותו הרמטית. מדליקים את האש ומביאים את המים לרתיחה. הקיטור המתקבל מחליף אוויר מתא העבודה, היוצא דרך זין היציאה הפתוח. כאשר כל האוויר הוצא ויוצא מהברז זרם אדים מתמשך, הברז נסגר, המכסה נסגר הרמטית. הקיטור מובא ללחץ הרצוי בשליטה של מנמטר. טמפרטורת הקיטור תלויה בלחץ: בלחץ אטמוספרי רגיל, מחט מד הלחץ עומדת על 0 atm. - טמפרטורת קיטור 100 מעלות צלזיוס, ב-0.5 אטמוספירה. - 112 מעלות צלזיוס, ב-1 atm. -121 מעלות צלזיוס, ב-1.5 אטמוספירה. - 127 מעלות צלזיוס, ב-2 atm. - 134 מעלות צלזיוס. בתום העיקור, כבו את החיטוי, המתינו עד שהלחץ יורד, שחררו בהדרגה אדים ופתחו את המכסה. בדרך כלל בלחץ של 1 atm. תוך 20-40 דקות, עיקור חומרי תזונה פשוטים ותמיסות שאינן מכילות חלבונים ופחמימות, רטבים, פשתן. החומרים לסטריליזציה חייבים להיות חדירים לאדים. בעת עיקור חומרים בכמויות גדולות (חומרים כירורגיים), משך הזמן גדל לשעתיים. בלחץ של 2 atm. לייצר חיטוי של חומר פתולוגי ותרביות פסולת של חיידקים.
חומרים מזינים המכילים סוכרים אינם ניתנים לעיקור ב-1 atm, מכיוון שהם מתקרמלים, ולכן הם נתונים לעיקור חלקי עם קיטור זורם, או לחטא ב-0.5 atm.
שיטות ביולוגיות ופיזיות משמשות לשליטה במשטר העיקור. השיטה הביולוגית מבוססת על העובדה שנבגים של Bacillus stearothermophilus מונחים בו-זמנית עם החומר המעוקר, שמתים ב-121 מעלות צלזיוס תוך 15 דקות. לאחר עיקור, נבגים לא צריכים לגדול על מצע מזין. השיטה הפיזיקלית מבוססת על שימוש בחומרים בעלי נקודת התכה מסוימת, למשל, גופרית (119 מעלות צלזיוס), חומצה בנזואית (120 מעלות צלזיוס). צינורות אטומים המכילים את החומר המעורבב עם צבע יבש (מגנטה) מונחות בחיטוי יחד עם החומר המיועד לעיקור. אם הטמפרטורה בחיטוי מספיקה, החומר יימס ויהפוך את צבע הצבע.
נוזל עיקורקיטור_מתבצע במכשיר קוך או בחיטוי עם מכסה לא מוברג וברז היציאה פתוח. המים במכשיר מחוממים ל-100 מעלות צלזיוס. הקיטור המתקבל עובר דרך החומר המונח ומעקר אותו. טיפול בודד ב-100 מעלות צלזיוס אינו הורג נבגים. לכן משתמשים בשיטת עיקור חלקי - 3 ימים ברציפות למשך 30 דקות, בין השאר יציאה ליום בטמפרטורת החדר. חימום ב-100°C גורם להפעלה תרמית של נבגים, כתוצאה מכך הם נובטים עד למחרת לצורות וגטטיביות ומתים במהלך החימום השני והשלישי. כתוצאה מכך, רק חומרי הזנה ניתן לעקר עם קיטור זורם, כי חומרים מזינים נדרשים להנבטת נבגים.
עבור חומרים שמתפרקים ב-100 מעלות צלזיוס (לדוגמה, סרום, חומרי תזונה המכילים חלבון), נעשה שימוש בסוג אחר של עיקור חלקי - דינדליזציה.החומר לסטריליזציה מחומם באמבט מים ב-56-60 מעלות צלזיוס במשך 5-6 ימים ברציפות - ביום הראשון למשך שעתיים, בשאר הימים למשך שעה.
עיקור על ידי הקרנה
קרני UV.מנורות קרינה אולטרא - סגולהמשמש לחיטוי אוויר של מוסדות רפואיים, קופסאות בקטריולוגיות ומעבדות, וכן לעיקור נוזלים באמצעות מכשירים מיוחדים.
עיקור על ידי קרינה מייננתחפצים שונים נחשפים בתעשייה הרפואית והמיקרוביולוגית: תרופות, חבישות, משי, כפפות כירורגיות, מזרקים חד פעמיים, צינורות פלסטיק למתן תוך ורידי וחומרים רבים אחרים.
יישום קרינה מייננתיש מספר יתרונות על פני עיקור בחום. בעת עיקור בקרינה מייננת, טמפרטורת החפץ שעוקר עולה מעט, ולכן שיטות כאלה נקראות עיקור קר. בעת עיקור בקנה מידה גדול, ניתן ליצור מסוע. החומרים מעוקרים בצורה ארוזה. ישנם שני סוגים של ציוד קרינה - קובלט-60 יחידות גמא ומאיצי אלקטרונים.
עיקור - (Lat. sterilis - despawning) או הרס מוחלט של מיקרואורגניזמים ונבגים שלהם על ידי חשיפה לגורמים פיזיקליים וגם לכימיקלים.
נכון להיום, בתוקף תקן התעשייה (OST 42-21-2-85) המגדיר את השיטות, האמצעים ואופני העיקור והחיטוי של מכשור רפואי, אשר מתווסף בצו מס' 408 ו"הנחיות מתודולוגיות לחיטוי, ניקוי וסטריליזציה לפני עיקור של מכשירים רפואיים", שאושר על ידי M3 מרוסיה ב-30 בדצמבר 1998 מס' M U-287-113.
כל המוצרים במגע עם פני הפצע, במגע עם דם או תרופות הניתנות להזרקה, וסוגים מסוימים של מכשירים רפואיים הבאים במגע עם הריריות במהלך הפעולה ועלולים לגרום להם נזק עוברים עיקור.
שיטות עיקור
ישנן שיטות תרמיות - פיזיות: קיטור, אוויר, glasperleny (בסביבה של כדורים מחוממים), כמו גם הקרנה אולטרה סגולה של אוויר פנימי: חדרי הלבשה, פרוצדורות, חדרי ניתוח. . בפרקטיקה הקלינית, משתמשים לרוב בשיטות עיקור תרמי, המורכבות מחשיפה לאדים בלחץ עודף וטמפרטורת עיקור (חיטוי) וחשיפה לאוויר חם יבש המגיע לטמפרטורת העיקור (משתמשים בתנורים יבשים בשינויים שונים).
שיטות כימיות של עיקור מתבצעות עם פתרונות של חומרי חיטוי או גזים של מוצרי פוליאתילן, ציוד לאוורור ריאות מלאכותי (ALV), אנדוסקופים שונים עם סיבים אופטיים. השיטה הכימית כוללת עיקור גז עם אתילן אוקסיד, פרופילן אוקסיד, מתיל ברומיד ותערובתם, וכן שיטת קיטור-פורמלדהיד.
שיטת עיקור על-קולית. עיקור על ידי קרינת אינפרא אדומה. שיטת קרינה ב (התקנה עם מקור קרינה לעיקור תעשייתי של פריטים חד פעמיים). בחירת השיטה תלויה בגורמים רבים, העיקריים שבהם:
1. החומר ממנו עשוי המוצר.
2. עיצוב מוצר.
3. תנאי הסטריליות של המוצר.
4. יעילות השיטה
אוטוקלאב (מיוונית auto - עצמו ולטינית clavis - מפתח) - פירושו "נעילה עצמית". חיטוי, או עיקור בסטריליזטור בקיטור, משמש לתהליך העיקור של מכשירים, כל מכשיר רפואי העשוי ממתכת, זכוכית, גומי וטקסטיל, תמיסות, חומרי תפר קשירה.
מצבי עיקור
מצב ראשון - טמפרטורה 132 מעלות צלזיוס, לחץ 2 אטמוספירות, זמן 20 דקות. המצב הראשון (העיקרי) מיועד לעיקור מוצרים עשויים מקליק גס, גזה (חומר חבישה, פשתן וכו'), זכוכית, כולל מזרקים המסומנים "200 'C", מוצרים העשויים ממתכת עמידה בפני קורוזיה.
מצב שני - טמפרטורה 120 מעלות צלזיוס, לחץ 1.1 אטמוספירה, זמן 45 דקות. המצב השני (עדין) מומלץ למוצרים העשויים מגומי דק, לטקס (כפפות ניתוח וכו') ו סוגים מסוימיםפולימרים (פוליאתילן בצפיפות גבוהה).
מצב שלישי - טמפרטורה 134 מעלות צלזיוס - 5 דקות, 2 atm.
שיטת עיקור אוויר
זה מתבצע במעקר אוויר עם אוויר חם יבש. מומלץ לעיקור של כל מכשיר רפואי עשוי מתכת, זכוכית, גומי סיליקון.
מצבי עיקור
מצב ראשון - טמפרטורה 180 מעלות צלזיוס, זמן 60 דקות. המצב הראשון (ראשי) מיועד לעיקור מוצרי זכוכית, כולל מזרקים המסומנים "200 מעלות צלזיוס", מוצרי מתכת: מכשירים כירורגיים, דנטליים, גינקולוגיים, כולל מתכות עמידות בפני קורוזיה.
מצב שני - טמפרטורה 160 מעלות צלזיוס, זמן 150 דקות. המצב השני (עדין) מיועד לעיקור מוצרים העשויים מגומי סיליקון, כמו גם חלקים של מכשירים והתקנים מסוימים.
עיקור עם פתרונות כימיים למי חמצן יש תכונת חיטוי בולטת. לעיקור משתמשים בתמיסת מי חמצן של 6% - חשיפה 180 דקות, טמפרטורה 50 מעלות צלזיוס; בטבילה מלאה לסטריליזציה של מוצרים העשויים מפולימרים, גומי, זכוכית ומתכות עמידות בפני קורוזיה - 360 דקות בטמפרטורה של 18 אינץ'. (תקופת סטריליות - שלושה ימים)
עיקור עם גזים העיקור מתבצע בסטריליזטור גז נייח. OST ממליצה לבצע עיקור גז של מספר מכשירים רפואיים עם אתילן אוקסיד או תערובת OB. אופטיקה, קוצבי לב, מוצרים מחומרים פולימריים, גומי, זכוכית, מתכת, חלקי פלסטיק של מכשירים שונים נתונים לעיקור. היישום המעשי של שיטה זו נתקל בקשיים משמעותיים, ולכן עיקור הגז טרם זכה לחלוקה הראויה מבחינת יכולותיו.
עיקור הוא שחרור מוחלט של עצמים סביבתיים מצורות צומח ורדום של מיקרואורגניזמים באמצעות שימוש בגורמים פיזיקליים או כימיים.
חיטוי - קבוצה של אמצעים טיפוליים ומניעתיים שמטרתם הרס של מיקרואורגניזמים בפצע, היווצרות פתולוגית אחרת או הגוף בכללותו.
אספסיס הוא קומפלקס של אמצעים טיפוליים ומניעתיים שמטרתם למנוע את החדרת חומרים זיהומיים לפצע, רקמות, איברים, חללי גוף של המטופל במהלך כל מניפולציות רפואיות (כולל אבחון).
עיקור מתבצע על מנת: 1) למנוע את החדרת מיקרואורגניזמים לגוף האדם במהלך התערבויות רפואיות; 2) אי הכללה של זיהום מיקרוביאלי של חומרים רפואיים ואבחונים, אמצעי תזונה ותרביות תאים המשמשים במחקרים מיקרוביולוגיים ואימונולוגיים.
שלבי עיקור
עיקור מכשור רפואי כולל שלושה שלבים: 1) חיטוי; 2) ניקוי לפני עיקור; ו-3) עיקור עצמו. כל המוצרים כפופים לחיטוי לאחר השימוש בחולים.
חיטוי מוצרים מתבצע על מנת להשמיד מיקרואורגניזמים פתוגניים ואופורטוניסטיים, כולל פתוגנים של דלקת כבד נגיפית וזיהום HIV, Mycobacterium tuberculosis ופטריות, כולל הסוג קנדידה. לאחר החיטוי, המוצרים נשטפים במים, מיובשים ומשמשים לייעודם או עוברים ניקוי וסטריליזציה לפני עיקור.
ניקוי טרום עיקור מתבצע על מנת להסיר חלבון, שומן ומזהמים מכניים, וכן שאריות תרופות.
עיקור מוצרים מתבצע על מנת להשמיד מיקרואורגניזמים מכל הסוגים, כולל צורות נבגים. העיקור כפוף לכל המוצרים הרפואיים הבאים במגע עם משטח הפצע, ריריות בסיכון לגרום להם נזק, וכן במגע עם דם או תרופות להזרקה.
חיטוי מכשור רפואי.
חיטוי מכשור רפואי מתבצע בשיטות פיזיקליות וכימיות. בחירת השיטה תלויה במאפייני המוצר, בחומרים המשמשים לייצור מוצרים ומטרתם.
שיטת חיטוי פיזיכולל הרתחה, חשיפה לאדי מים רוויים או אוויר חם יבש.
הרתחה של כלים מתבצעת במים מזוקקים למשך 30 דקות מרגע הרתיחה או במים בתוספת של 2% תמיסה של סודה לשתייה (נתרן ביקרבונט) למשך 15 דקות מרגע הרתיחה. סוג זה של חיטוי משמש למוצרים העשויים מזכוכית, מתכות, חומרים פולימריים עמידים בחום וגומיות. לפני הרתיחה מנקים את המוצרים ממזהמים אורגניים על ידי שטיפה במי ברז או בתמיסת חומרי חיטוי שאינם בעלי אפקט קיבוע במיכלים מיוחדים (בכפוף לאמצעי בטיחות בעבודה עם חומר ביולוגי). מי כביסה עוברים חיטוי נוסף.
שיטת הקיטור באמצעות קיטור מים רוויים בלחץ עודף מחטאת זכוכית, מתכת, גומי, לטקס, חומרים פולימריים עמידים בחום. הם מונחים בקופסאות עיקור (ביקסים) ומניחים במעקר קיטור (אוטוקלאב). החיטוי מתבצע ב-110 מעלות צלזיוס למשך 20 דקות. אין צורך בניקוי מקדים של מוצרים ממזהמים אורגניים.
שיטת האוויר מחטאת מוצרים עשויים זכוכית, מתכות, גומי סיליקון פנימה טופס פתוחעל המדפים של מעקר אוויר (תנור יבש) בטמפרטורה של 120С למשך 45 דקות. במקרה זה, נדרש ניקוי מקדים חובה של מוצרים ממזהמים אורגניים.
השיטה הפיזית לחיטוי מכשור רפואי היא פשוטה, ידידותית לסביבה ובטוחה לצוות.
שיטת חיטוי כימיכרוך בשימוש בתמיסות של כימיקלים-חיטוי, כאשר מכשור רפואי טובל מיד לאחר השימוש בהם בחולים. קדם-מוצרים מנוקים ממזהמים אורגניים על מנת להימנע מהפחתת יעילות פתרונות העבודה. מוצרים ניתנים להסרה עוברים חיטוי בצורה מפורקת, יש למלא את התעלות והחללים של המוצרים בתמיסת חיטוי. ניתן לטהר מוצרים שאינם במגע ישיר עם המטופל על ידי ניגוב פעמיים עם מטלית לחה בתמיסת חיטוי.
ל שיטה כימיתחיטוי משתמש בחומרים בעלי השפעה וירואידלית נגד פתוגנים של הפטיטיס ויראלית וזיהום HIV ( Alaminol, Javel, Lysoformin-3000, PVC, Combidesinfectant של מכשירים וכו'), ובארגונים נגד שחפת - חומרים בעלי פעולת mycobactericidal ( Sidex, Septodor, Chloramine B, Javelion ). החיטוי מתבצע בהתאם למשטרי המומלצים לזיהומים אלו. אין להשתמש בחומרי חיטוי שאין להם תכונות אלה כדי לטהר מכשור רפואי.
חומרים המכילים כלור, כמו גם רוב המוצרים המבוססים על מי חמצן, מיועדים למוצרים העשויים ממתכות עמידות בפני קורוזיה, גומיות, פלסטיק וזכוכית. השימוש באלכוהול אתילי מומלץ רק לחיטוי מוצרי מתכת לאחר ניקוי מקדים שלהם מתרכובות אורגניות. מוצרים המכילים אלדהיד מומלצים למוצרים העשויים מזכוכית, מתכות, חומרים פולימריים, כולל תרמולאבילים. מי חמצן עשוי לשמש לחיטוי מכשירים רפואיים.
על מנת למנוע התפתחות עמידות של מיקרואורגניזמים לחומרי חיטוי, מומלץ להחליף מדי שבוע של חומרי חיטוי כימיים שהם חלק מקבוצת תרופות שונה לחומר הפעיל.
עם השלמת החיטוי, המכשירים הרפואיים נשטפים במים זורמים, ניקוי מכניהמברשות, המברשות, המפיות שלהם, ולאחר מכן הם משמשים למטרה המיועדת שלהם או להמשיך לשלב הבא של עיקור - ניקוי לפני עיקור.